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科研达人手把手教你如何选择超优性价比的抗体&蛋白偶联试剂盒

发布时间:2020年02月20日 浏览次数:496

一:通俗定义偶联技术

将酶、生物素、荧光素、琼脂糖、磁珠等一些易于检测或易于分离的物质,用一定的技术共价标记或缀合到抗体、蛋白质或其它小分子物质上。

二:偶联技术产生背景

抗体、蛋白质或其它小分子的偶联是许多类型的生物学实验的必要步骤。比如:为了在免疫测定(比如WB/IHC/IF等免疫学实验)中进行特异性蛋白的检测,我们将一抗或者二抗上偶联上酶、荧光素等;

在细胞染色(生物成像)应用中,将活性染料(荧光素)直接与细胞外或细胞内的蛋白(多肽)结合,以产生可见且可测量的染色;

将蛋白质或抗体上偶联琼脂糖或磁珠,提供了靶向纯化的方法。比如,Abbkine用于IP实验的琼脂糖(磁珠)偶联的抗体,直接省去了ProteinA/G的使用。

三:各品牌偶联试剂盒大揭秘(以HRP偶联试剂盒和绿色荧光偶联试剂盒为例)

  1. HRP偶联试剂盒
品牌 可标记的样本类型 试剂盒组分

 

实验耗时 规格/价格 货期
Abbkine 样本含游离氨基即可 1. 预活化的HRP溶液

2. 偶联标记液

3. 反应终止液

3.5-4h

 

3*20ug/¥1000

100ug/¥1200

3*100ug/¥1400

1mg/¥2200

 

现货
Abcam 30ug/¥2934

100ug/¥4089

300ug/¥4822

1mg/¥6152

5mg/¥20946

 

1-2周
Abnova 3x40ug/¥3990 3x400ug/¥4410 1-2周
ThermoFisher 1. 预活化的HRP溶液

2. 偶联标记液

3. 反应终止液

4. Protein A/G柱子、结合液、洗脱液

过夜+>2h 300µg/¥10600

 

2-3周

* Abbkine HRP偶联试剂盒如何从结合抗体中去游离HRP(分子量40KD)?

Abbkine HRP偶联试剂盒在设计时,已经考虑到这点。试剂盒可在反应结束时提供低水平的游离HRP。因此,不需要过滤步骤,试剂盒中提供的终止液会封闭游离HRP的反应基团;

* ThermoFisher品牌中Protein A/G柱子的作用是去除游离的HRP。

  1. 绿色荧光偶联试剂盒
品牌 可标记的样本类型 试剂盒组分

 

实验耗时 规格/价格 货期
Abbkine 样本含游离氨基即可 1. 预活化的荧光染料

2. 偶联标记液

3. 纯化柱

1.5h

 

3*20ug/¥1200

100ug/¥1400

3*100ug/¥1600

1mg/¥2500

现货
Abcam 1. 预活化的荧光染料

2. 偶联标记液

3. 反应终止液

0.5-1h 30ug/¥2593

100ug/¥4571

300ug/¥7106

1mg/¥10966

1-2周
ThermoFisher 1. 预活化的荧光染料

2. 偶联标记液

3. 纯化柱

1.5-2h 100µg/¥8737

 

2-3周 

* 纯化柱的目的是要把未偶联的染料和偶联产物分开,因为染料都是小分子(分子量1KD左右),Abbkine提供的纯化柱体积是50KDa, 0.5 ml;ThermoFisher提供的纯化柱也是针对抗体(抗体分子量160KD左右)的纯化。如果客户纯化的蛋白分子量小或者很大,需要自己配备合适的超滤管。

超滤管配备建议如下:

蛋白 超滤管
6<MW<20K 3K
20<MW<60K 10K
60<MW<100K 30K
100<MW<200K 50K
200K<MW 100K

综上所述,你会选择哪个品牌的偶联试剂盒呢?作为Abbkine的铁粉,我再额外总结下Abbkine LinKine™偶联系列产品特点&优势:

  • 优化的方案 -遵循标准实验流程,凭借优异的预活化的染料,蛋白质比率和专利溶液配方,以获得最佳活性或者荧光。
  • 操作简便- 三步操作即可实现,将偶联基团结合到抗体或者其它蛋白的伯胺位点上。
  • 定制化 -改变摩尔比,反应缓冲液和pH值,以及其它参数,可实现不同水平的偶联和活性。
  • 高效纯化 - 试剂盒包括纯化柱,确保快速有效地去除未反应的染料和优异的蛋白质/抗体回收。
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