科研达人手把手教你如何选择超优性价比的抗体&蛋白偶联试剂盒
一:通俗定义偶联技术
将酶、生物素、荧光素、琼脂糖、磁珠等一些易于检测或易于分离的物质,用一定的技术共价标记或缀合到抗体、蛋白质或其它小分子物质上。
二:偶联技术产生背景
抗体、蛋白质或其它小分子的偶联是许多类型的生物学实验的必要步骤。比如:为了在免疫测定(比如WB/IHC/IF等免疫学实验)中进行特异性蛋白的检测,我们将一抗或者二抗上偶联上酶、荧光素等;
在细胞染色(生物成像)应用中,将活性染料(荧光素)直接与细胞外或细胞内的蛋白(多肽)结合,以产生可见且可测量的染色;
将蛋白质或抗体上偶联琼脂糖或磁珠,提供了靶向纯化的方法。比如,Abbkine用于IP实验的琼脂糖(磁珠)偶联的抗体,直接省去了ProteinA/G的使用。
三:各品牌偶联试剂盒大揭秘(以HRP偶联试剂盒和绿色荧光偶联试剂盒为例)
品牌 | 可标记的样本类型 | 试剂盒组分
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实验耗时 | 规格/价格 | 货期 |
Abbkine | 样本含游离氨基即可 | 1. 预活化的HRP溶液
2. 偶联标记液 3. 反应终止液 |
3.5-4h
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3*20ug/¥1000
100ug/¥1200 3*100ug/¥1400 1mg/¥2200
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现货 |
Abcam | 30ug/¥2934
100ug/¥4089 300ug/¥4822 1mg/¥6152 5mg/¥20946
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1-2周 | |||
Abnova | 3x40ug/¥3990 3x400ug/¥4410 | 1-2周 | |||
ThermoFisher | 1. 预活化的HRP溶液
2. 偶联标记液 3. 反应终止液 4. Protein A/G柱子、结合液、洗脱液 |
过夜+>2h | 300µg/¥10600
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2-3周 |
* Abbkine HRP偶联试剂盒如何从结合抗体中去游离HRP(分子量40KD)?
Abbkine HRP偶联试剂盒在设计时,已经考虑到这点。试剂盒可在反应结束时提供低水平的游离HRP。因此,不需要过滤步骤,试剂盒中提供的终止液会封闭游离HRP的反应基团;
* ThermoFisher品牌中Protein A/G柱子的作用是去除游离的HRP。
品牌 | 可标记的样本类型 | 试剂盒组分
|
实验耗时 | 规格/价格 | 货期 |
Abbkine | 样本含游离氨基即可 | 1. 预活化的荧光染料
2. 偶联标记液 3. 纯化柱 |
1.5h
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3*20ug/¥1200
100ug/¥1400 3*100ug/¥1600 1mg/¥2500 |
现货 |
Abcam | 1. 预活化的荧光染料
2. 偶联标记液 3. 反应终止液 |
0.5-1h | 30ug/¥2593
100ug/¥4571 300ug/¥7106 1mg/¥10966 |
1-2周 | |
ThermoFisher | 1. 预活化的荧光染料
2. 偶联标记液 3. 纯化柱 |
1.5-2h | 100µg/¥8737
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2-3周 |
* 纯化柱的目的是要把未偶联的染料和偶联产物分开,因为染料都是小分子(分子量1KD左右),Abbkine提供的纯化柱体积是50KDa, 0.5 ml;ThermoFisher提供的纯化柱也是针对抗体(抗体分子量160KD左右)的纯化。如果客户纯化的蛋白分子量小或者很大,需要自己配备合适的超滤管。
超滤管配备建议如下:
蛋白 | 超滤管 |
6<MW<20K | 3K |
20<MW<60K | 10K |
60<MW<100K | 30K |
100<MW<200K | 50K |
200K<MW | 100K |
综上所述,你会选择哪个品牌的偶联试剂盒呢?作为Abbkine的铁粉,我再额外总结下Abbkine LinKine™偶联系列产品特点&优势:
- 优化的方案 -遵循标准实验流程,凭借优异的预活化的染料,蛋白质比率和专利溶液配方,以获得最佳活性或者荧光。
- 操作简便- 三步操作即可实现,将偶联基团结合到抗体或者其它蛋白的伯胺位点上。
- 定制化 -改变摩尔比,反应缓冲液和pH值,以及其它参数,可实现不同水平的偶联和活性。
- 高效纯化 - 试剂盒包括纯化柱,确保快速有效地去除未反应的染料和优异的蛋白质/抗体回收。