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凋亡实验干货 | 让凋亡细胞“爬山”,展现生命的光辉

发布时间:2020年07月06日 浏览次数:638

网友最近被优质的网剧《隐秘的角落》洗脑,多梗频出的该剧要素很多。今天要说的这个梗就是“凋亡”细胞了。说到“凋亡”,大家可能就会想到生命的来去匆匆,忍不住感慨“死如落叶般静美”,殊不知“落红不是无情物,化作春泥更护花”。凋亡细胞用自己生命终结,成就了整个生命体发育的进程。这正是生命光辉的绽放,值得研友们进行深入地探索。那么究竟何为细胞凋亡呢?

细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用;它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。细胞发生凋亡时,就像树叶或花的自然凋落一样,对于这种生物学观察,借用希腊“Apoptosis”来表示,意思是像树叶或花的自然凋落,可译为细胞凋亡。那么凋亡到底是个什么样的存在呢?

细胞凋亡是动物发育过程中的必经之路,看了以下的例子,生命体发育过程中,细胞凋亡现象无处不在:

  • 从蝌蚪到蛙的变态发育;
  • 昆虫的蜕变;
  • 高等哺乳动物指间蹼的消失,如人体胚胎发育中,胚胎长到第5周时出现扁盘状的肢体萌芽,手指和脚趾之间的蹼消失,四肢才能顺利形成其最终形态;
  • 眼睛中玻璃体和晶状体的细胞死亡,是眼睛对光通透重要的一步。

就算在成熟的个体中,细胞凋亡也是必不可少的:

  • 细胞数目和组织大小的控制;
  • 组织的更新(如鼻的嗅表皮、皮肤表皮细胞的更替);
  • 免疫系统对丧失功能的或是有潜在危险的细胞进行选择和清除,如自然杀手细胞(NK)对癌细胞的非专一性胞杀作用;
  • 清除坏变的细胞赋予中枢神经系统可塑性。研究人员尝试在胚胎期激活小鼠的bcl-2基因。该基因会阻止神经细胞的细胞凋亡过程。出生的小鼠脑部神经元数量因此比正常的小鼠多,容积变大。但在测试中显得比正常小鼠迟钝;
  • 对生殖细胞进行选择(大约95%的生殖细胞会在其成熟之前通过细胞凋亡被清除)。

 

Abbkine的科学家对于细胞凋亡的研究已经深入到了细胞,蛋白和分子水平:

1.蛋白质水平的Annexin V系列细胞早期凋亡试剂盒,检测磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻:

产品名称 货号 Abs/Em 类似波长染料
Annexin V-AbFluor™ 405 Apoptosis Detection kit KTA0001 Annexin V- AbFluor™ 405: Abs/Em = 404/431 nm; PI: Abs/Em = 535/617 nm (with DNA) Pacific Blue, Alexa Fluor 405, Dylight 405
Annexin V-AbFluor™ 488 Apoptosis Detection kit KTA0002 Annexin V- AbFluor™ 488: Abs/Em = 491/517 nm; PI: Abs/Em = 535/617 nm (with DNA) FITC, Alexa Fluor 488, Dylight 488
Annexin V-AbFluor™ 555 Apoptosis Detection kit KTA0003 Annexin V- AbFluor™ 555: Abs/Em = 555/565 nm Cy3, TRITC, Alexa Fluor 546, Dylight 549
Annexin V-AbFluor™ 647 Apoptosis Detection kit KTA0004 Annexin V- AbFluor™ 647: Abs/Em = 650/665 nm; PI: Abs/Em = 535/617 nm (with DNA) Cy5, Alexa Fluor 647, Dylight 649

 

  1. 线粒体膜电位检测,JC-1
产品名称 货号
Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (JC-1) KTA4001

 

 

3.细胞水平的Caspase系列试剂盒,检测凋亡相关蛋白Caspase的表达量,检测中期凋亡:

货号 产品名称
KTA3020 细胞凋亡

(比色法)

Caspase-1 Assay Kit (Colorimetric)
KTA3021 Caspase-2 Assay Kit (Colorimetric)
KTA3022 Caspase-3 Assay Kit (Colorimetric)
KTA3023 Caspase-4 Assay Kit (Colorimetric)
KTA3024 Caspase-6 Assay Kit (Colorimetric)
KTA3025 Caspase-8 Assay Kit (Colorimetric)

Caspase半胱氨酸蛋白酶家族引发的级联反应是细胞凋亡过程的中心环节,其激活主要包括线粒体依赖途径和死亡受体介导的信号转导途径,激活后的下游Caspase,通过切割特异性底物,导致细胞凋亡。

 

  1. 分子水平TUNEL试剂盒,检测细胞凋亡晚期试剂盒
产品名称 货号
TUNEL Apoptosis Detection Kit (Green Fluorescence) KTA2010
TUNEL Apoptosis Detection Kit (Orange Fluorescence) KTA2011

   

Abbkine 凋亡研究试剂盒使用FAQ:

  1. 做TUNEL凋亡检测,需要抗原修复或者冰冻修复吗?

需要细胞固定,不需要做抗原修复,本类试剂盒标记的是细胞核内的断裂基因,而不是抗原蛋白,因此不需要进行抗原修复。

  1. Annexin V-AbFluor™ 488 Apoptosis Detection kit试剂盒,可不可以在染色之后,等到60分钟左右再去做下一步呢?

因为这个凋亡实验是活染,细胞先染完第一种染料,如果间隔时间太长,细胞活力就会受影响。

  1. Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (JC-1)试剂盒,能用分光光度计检测吗?

不建议用,该试剂盒是基于线粒体跨膜电位的变化,运用JC-1进行细胞染色,区分健康和凋亡细胞,建议用流式细胞仪或者荧光显微镜进行检测。

  1. 检测Caspase,组织样本是400-500个细胞,该样本量是否足够?

本试剂盒需要组织的量大概是5 - 20 mg。

凋亡研究地领域:

目前在细胞凋亡与癌症发生和各种自体免疫性疾病之间的关系有着很多研究。人们希望激发癌细胞的细胞凋亡,以达到消弭癌症的目的。另有为了维持人类大脑的体积,使细胞凋亡的基因在人类身上受到了抑制的说法。

细胞凋亡在神经退化性疾病中所扮演的角色(如阿兹海默氏症(失智症的类型之一)、亨丁顿舞蹈症(Huntington's disease)、帕金森病(Parkinson's Disease)、肌肉萎缩性侧索硬化症(ALS),是目前热门的研究话题,人们在这个领域也进行着很多研究。

除了凋亡研究,Abbkine科学家还做了细胞增殖,衰老,分化,毒性等方面的深入研究。欢迎广大Abbkine粉丝多多关注,还会有很大科研惊喜等着大家哟。同时,Abbkine的技术专家为了给广大读者提供学习生物知识的平台,经过不懈努力,将多种高端生物实验的干货整理出来,后期陆续在微信公众号中刊登,请广大热爱科学的读者持续关注Abbkine公众号。

Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

 

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