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染细胞吗?核酸染料注意查收

发布时间:2021年03月04日 浏览次数:608

细胞核是细胞的控制中心,在细胞的代谢、生长、分化中起着重要作用,是遗传物质的主要存在部位,细胞核中最重要的结构是染色质,染色质的组成成分是蛋白质分子和DNA分子,而DNA分子又是主要遗传物质。尽管细胞核的形状有多种多样,但是它的基本结构却大致相同。其中Ethidium Homodimer-1(溴乙啡锭二聚体1)、hochest染料、DAPI、PI等是最常见的细胞核染料:

货号 名称 荧光颜色 染细胞类型 描述及应用
BMD00060 Ethidium Homodimer-1 (EthD-1)

 

红色荧光 死细胞 • Ethidium Homodimer-1是一种高亲和性的荧光核酸染料,与DNA或RNA结合后,可以使荧光增强30多倍。

• 由于带有较强正电荷,所以该染料不能穿过细胞膜进行活细胞染色,但是可以准确的检测溶液中的核酸或者解体细胞中的核酸,是一种较灵敏的核酸染色剂。

• 此外EthD-1可与钙黄绿素AM联合使用,分别染色死细胞和活细胞,从而判断细胞活力和毒性。

 

BMD00061 Hoechst 33258 蓝色荧光

 

活细胞(主要是早期调亡细胞) • Hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色,该染料在染细胞核时会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。

• Hoechst染料在细胞周期和凋亡(早期凋亡)研究中被广泛应用,也被广泛应用于核复染色,有Hoechst 33258和Hoechst 33342两种。

• Hoechst 33258在活细胞中DNA的AT序列富集区域的小沟处与DNA结合,广泛用于细胞凋亡检测,染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。两者区别不大,但是Hoechst 33342对细胞的毒性作用更小一些,因此一般Hoechsts 33258用于细胞固定后再染色,而Hoechst 33342则可以对活细胞直接进行染色。

BMD00062 Hoechst 33342
BMD00063 DAPI 蓝色荧光 活细胞和固定细胞 • DAPI是一种常用的可以穿透细胞膜蓝色荧光DNA染料,可对DNA 染色的细胞核染色试剂,其与DNA结合后可以产生比DAPI 自身强20多倍的荧光,而与单链DNA结合无荧光的增强。

• DAPI常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI,荧光强度比Hoechst低,但光稳定性高于Hoechst。部分重垂,研究员可以替用这项特性在单-的样品上进行多重荧光染色。

• DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合,因此DAPI对生物体而言,也被视为-种毒性物质与致癌物。使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。


除了Ethidium Homodimer-1、hochest染料、DAPI外,碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)也是一种常见的细胞核染色染料。PI是一种可对DNA染色的细胞核染色的核酸染料(红试剂,常用于细胞凋亡检测),它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI能够透过细胞膜而将细胞核染成红色,能够用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI作为红色荧光复染剂首选,经常与Calcein-AM或者FDA等荧光探针合用,区分活死细胞。

使用PI单一染色观测培养细胞,只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡(当然晚期凋亡PI亦可着色)。但是如果我们只是想知道细胞的死亡情况,而不是仔细区分坏死或凋亡,那么PI单一染色即可以。但是如果我们一定要认定细胞的凋亡,那么PI单一染色显然不够!这个时候我们同样可以选用Abbkine的细胞状态检测系列产品,例如,TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(细胞凋亡晚期),Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒和线粒体膜电位分析试剂盒(JC-1)(细胞凋亡早期)以及Caspase系列活性分析试剂盒(比色法)(细胞凋亡中期)。

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