产品英文名称 | AbFluor™ 488-Phalloidin |
实验建议 | AbFluor™ 488-鬼笔环肽特异性地结合F-actins,与荧光素-鬼笔环肽偶联物相比,具有更强的光稳定性。使用nM浓度的鬼笔环肽衍生物,即可便捷地标记,鉴定,定量F-actins,适用于甲醛固定与透化处理的组织切片、细胞培养物或无细胞实验。 |
产品形式 | 冻干粉 |
特点&优势 | • 优化的实验方案,特别适用于甲醛固定与透化处理的组织切片、细胞培养物或无细胞实验中的F-actins标记,鉴定以及定量需求。 • 专利的AbFluor™ 488-鬼笔环肽 (绿色荧光) (Ex/Em = 490/515 nm),特异性地结合F-actins,且兼具比其它荧光素-鬼笔环肽偶联物更强的光稳定性。 |
使用中注意事项 | 鬼笔环肽为有毒物质,请小心处理。 |
保存建议 | 保存于-20℃条件下,有效期为12个月。请避光保存。 |
运输条件 | 蓝冰运输 |
警告 | 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。 |
背景 | 鬼笔环肽(phalloidin),是从一种剧毒磨菇(Amanita phalloides)中分离出来的一种多肽物质,属于毒伞肽类毒素,是一种强烈毒素。它是一种特异性结合F-肌动蛋白的双环肽,因此,使用荧光染料偶联的鬼笔环肽可以非常方便地研究F-actins的分布。在鬼笔环肽内部,半胱氨酸和色氨酸之间存在不寻常的硫醚桥,可形成内环结构。当pH升高时,硫醚被裂解,鬼笔环肽丧失对肌动蛋白的亲和力。 |
甲醇会破坏Actin蛋白,因此不能使用含有甲醇的固定液,尽量使用不含甲醇的甲醛进行固定。
当细胞和组织经由二甲苯或甲醇之类的溶剂处理时(例如组织切片脱石蜡期间),它通过阻止鬼笔环肽结合的方式来影响F-actin。可以使用通常不用有机溶剂洗涤的冷冻切片代替石蜡切片,或者可以使用抗肌动蛋白抗体。
建议不重复使用,我们的鬼笔环肽按说明书添加,浓度较低,大约为6.67uM,这是染料不能重复利用的原因。
1. 摸索鬼笔环肽最佳染色工作液浓度及染色时间。 2. 细胞未固定好,建议使用新鲜配置的4%多聚甲醛进行固定。 3. 细胞未透化彻底,透化时间可相应延长。
理论上来说,鬼笔环肽分子量较小,染色细胞可以不进行透化,但标记染料后的鬼笔环肽分子量较大,不进行透化步骤,染色效果不好,还是建议透化后染色。
1. 检查储液、工作液配制是否有误。 2. 固定及透化步骤尤为重要,使用新鲜配置的4%多聚甲醛进行固定,使用新鲜配置的0.5% Triton X-100 进行透化。摸索最佳的固定及透化时间。 3. 摸索最佳染色工作液浓度及染色时间。
微信公众号
评价
目前还没有评论