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WB干货 | 返校后你必须知道的WB蛋白分析的产品组合方案

发布时间:2020年06月04日 浏览次数:395

继上期的《WB干货|返校后你必须要知道的WB样本前处理产品组合方案》之后,小伙伴们对于样本前处理学习之后都深有体会。小编在这里也收到了Abbkine忠实的新老客户对Abbkine产品的热切渴望。于是,WB干货系列之二:返校后你必须知道的WB转膜后的产品组合方案,应运而生,为大家继续解疑答惑。

上一期,给大家讲到了蛋白定量产品,大家可能会好奇,到底蛋白定量产品应该如何选择合适的呢?接下来为大家揭晓:

蛋白定量目前最受欢迎的要数BCA法和Bradford法了:

BCA法:可耐受去污剂:SDS、TritonX-100,Tween-20等,但不耐还原剂,若样本含有去污剂不含还原剂,可使用该法(推荐KTD3001

Bradford法:可耐受耐受大部分样品中的化学物质,不耐高浓度去污剂,若样本含有高浓度的去污剂,可使用该法(推荐KTD3002

蛋白定量之后,做蛋白分析自然是广大WB实验者最关心的问题了。

第一步是上样了,上样过程中,除了大家不能忘记的样本顺序之外,最重要的要数蛋白Marker了,为了能清楚地指示蛋白分子量大小,有的资深WB操作者会选择点2-3个预染蛋白孔,避免实验的不确定性,提高指示的清晰度。这里为大家推荐两款彩色预染蛋白marker:

从实验效果图来看,BMM3001BMM3002 marker的色彩鲜明,清晰度和对比度是非常高的。指示结果的参考价值都是非常高的。

经过紧张漫长的跑胶转膜步骤之后,终于进入了WB的免疫步骤阶段。这时如何正确的选择内参抗体,将成为WB实验辅助的重要步骤,下面干货又来了——三大正确内参选择的法宝:

1.  样本种属来源:哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,植物实验样本选用plant actin、Rubisco等

2.  蛋白分子量:应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上;对于超过100 kDa的高分子量蛋白,推荐使用Vinculin粘着斑蛋白作为内参抗体。

3.  蛋白表达部位:根据蛋白表达位置的不同可以选择更加合适的抗体。常用的广泛性的β-actin、β-tubulin、GAPDH;检测细胞核Lamin A、Histone H3、PCNA,检测细胞膜Na,K ATPase等等。

Abbkine的内参抗体除了游离抗体外还有经过标记物偶联的直标抗体。如果您觉得还不够,那么还可以与我们Abbkine的技术专家(support@abbkine.com)联系,深入沟通,我们会帮您找到与您的实验最合适的内参抗体。

除了内参抗体之外,靶蛋白抗体的选取才是我们WB实验的点睛之笔,说到这里您可能会考虑:如何才能选到特异性强,灵敏度高,文献支持多的抗体呢?首选就是Abbkine的臻品一抗了,一听这个名字就知道,我们这个抗体是经过Abbkine科学家对抗体功能性质进行精心试验过的。所以用过的客户都赞不绝口。不信?你也可以试试。

当然,Abbkine的普通单抗和多抗也是效果良好,性价比极高的。用过的童鞋都说好。如果客户的样本是带有蛋白标签的重组蛋白,检测我们也能提供对应的标签抗体及其直标抗体,满足多种实验需求的客户。

货号 名称
A02010 Anti-DDDDK Tag Mouse Monoclonal Antibody (1B10)
A02020 Anti-GFP Tag Mouse Monoclonal Antibody (3D3)
A02030 Anti-GST Tag Mouse Monoclonal Antibody (2A8)
A02040 Anti-HA Tag Mouse Monoclonal Antibody (4F6)
A02050 Anti-His Tag Mouse Monoclonal Antibody (5C3)
A02060 Anti-Myc Tag Mouse Monoclonal Antibody (2D5)

当然也有许多客户对Abbkine自主研发的偶联试剂盒感兴趣,我们公司也有给大家精心打造的LIKINE系列的试剂盒,自己偶联的抗体,用起来也会很有成就感。

实验的最后,当然是显色液的使用了,Abbkine的ECL显色液可达到皮克级别和飞克级别。这个灵敏度是非常可观的。SuperLumia高敏以及超敏ECL产品具有极高的灵敏度, 对样品和抗体的需求量更低;发光信号强烈且持续时间长。

货号 名称
K22020 SuperLumia ECL HRP Substrate Kit
K22030 SuperLumia ECL Plus HRP Substrate Kit

 

Abbkine的技术专家为了给广大读者提供学习生物知识的平台,经过不懈努力,将多种高端生物实验的干货整理出来,后期陆续在微信公众号中刊登,请广大热爱科学的读者持续关注Abbkine公众号。

Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

 

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