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Abbkine带你了解生化检测!

发布时间:2021年10月29日 浏览次数:400

1.什么是生化检测?

生化检测,顾名思义,就是用生物或化学方法对样本进行检测。在临床上,医学检测就经常要用到生化检测,而在科学研究方面,生化检测更是为物质含量测定、酶活力快速检测、药物研发等方面提供了极大的便捷。

2.常见的生化检测物质

1)蛋白质和氨基酸:酶是最常见的蛋白质,它们催化代谢中的各类化学反应。一些蛋白质具有结构或机械功能,如参与形成细胞骨架以维持细胞形态,还有许多蛋白质在细胞信号传导、免疫反应、细胞黏附和细胞周期调控中扮演重要角色。如:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、黄嘌呤氧化酶(XO)等;

2)脂类:一般用于形成生物膜,如细胞壁;此外,它们也可以作为机体能量来源。如:甘油三酯、胆固醇等;

3)糖类:糖类一般用于储存和运输能量。如:葡萄糖、乳糖等;

4)辅酶:细胞利用一系列小分子代谢中间物在不同的反应之间携带化学基团,这些基团转移的中间物被称为辅酶。如:NAD+/NADH、NADP+/NADPH等;

5)矿物质:金属元素被一些蛋白质用作辅因子或者对于酶活性的发挥具有关键作用。如:锌、铁、钙等。

3.生化检测试剂盒和ELISA检测有什么异同?

名称 生化检测试剂盒 ELISA检测试剂盒
原理 化学反应 抗原-抗体特异性
检测目标 酶、糖类、离子、蛋白、有机小分子 蛋白、有机小分子
检测仪器 酶标仪、紫外-可见分光光度计、全自动化生化分析仪 酶标仪
检测方法 比色法、荧光法、免疫比浊法 比色法
结果表现形式 浓度、酶活 浓度
相对优势 检测范围宽、操作简便、样本种类广 灵敏度高、特异性高

4.有哪些仪器可以进行检测?

检测仪器 优点 缺点
分光光度计 灵敏度高、波长范围广(通常为全波段) 样本使用量大、操作不方便
酶标仪 仪器操作简单、样本用量少 灵敏度低、可供选择的波长少
荧光酶标仪 样本用量更少、灵敏度高、操作简单、特异性好、结果准确 /

5.生化检测常见问题有哪些?

1)是否可以检测冻存的样本?

通常新鲜样本和冻存样本都可用于大多数生化指标的测定,但最好还是采用新鲜样本,因为根据指标的不同,样本的冻存对结果的影响也不同。一般情况下,随着冻存时间的延长,样本的酶活力会逐渐下降,甚至会完全失活。而某些指标中,冻存样本的检测结果会比新鲜样本检测结果高,如血氨。组织匀浆样本最好当天检测,若不能当天检测,这种情况推荐直接冻存组织,而不是组织匀浆。样本切忌反复冻融,建议收集样本之后,分装冻存,避免样本反复冻融。

2)生化酶标板可以拆吗?可以用普通板子替代吗?

生化的板子是没有经过处理的空板子(无包被),如果一次用不完建议提前把不用的板条拆卸并放置于自封袋中,也可以用覆膜盖着,避免污染,室温放置即可。如果实验过程中板子不够用,可以用实验室中普通的96孔板代替。荧光法和紫外的板子是不可拆卸的,也不能用普通的96孔板代替。

3)收集组织或细胞样本后,如何匀浆?

  • 手工匀浆:将样本(含匀浆介质)倒入玻璃匀浆管中,上下转动研磨数十次(6-8分钟),使组织匀浆化。
  • 机械匀浆:用组织匀浆机,在冰水浴条件下研磨制成组织匀浆,皮肤、肌肉组织及植物组织等可适当延长匀浆时间。
  • 超声破碎:用超声波发生器超声处理,在冰水浴条件下,破碎细胞;或者用超声波破碎仪,间隙3 s进行处理,总时间5 min。
  • 反复冻融:适用于细胞样本,即用低渗液或双蒸水重悬细胞,再将细胞悬液进行“冷冻-融化-冷冻”循环,重复3次左右。

4) 标准品或样品不显色?

样本中确实不含有该指标或者指标含量太低导致的;前处理不当:例如测定酶活,使用了导致酶失活的化学试剂等;样本保存不当或提取方法不当等;试剂保存不当,包括保存温度、放置太久过期了等,导致试剂盒中某些试剂失效。

5) 检测数据与文献报道或者实验室此前测定数据结果差异大?

  • 样品本身的影响:同一指标在不同样品以及同一样品不同发育阶段或者不同环境下,其浓度或酶活会发生非常大的变化;
  • 测定方法的影响:同一指标因为测定方法不同,检测结果会出现较大的差异,与文献对比时,应注意文献的检测方法、培养和处理条件及计算公式、单位、单位的定义等;
  • 操作和仪器设备的影响:操作者取样习惯、匀浆程度和外部检测环境等都会对检测结果有很大影响。不同仪器设备的检测限和稳定性也会有一定影响;
  • 与其他文献检测结果比较时,应比较实验组与对照组的数据差异性和变化趋势,而不是检测结果的数值。

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