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还在被众多生化检测问题困扰?在这里一站式解决所有问题

发布时间:2022年07月21日 浏览次数:141

生化检测不知道样本怎么处理?样品不显色怎么办?生化检测FAQ大合集,以下盘点了生化检测常见问题,为您解决后顾之忧

 

1.是否可以检测冻存的样本?

答:通常新鲜样本和冻存样本都可用于大多数生化指标的测定,但最好还是采用新鲜样本,因为根据指标的不同,样本的冻存对结果的影响也不同。一般情况下,随着冻存时间的延长,样本的酶活力会逐渐下降,甚至会完全失活。而某些指标中,冻存样本的检测结果会比新鲜样本检测结果高,如血氨。

组织匀浆样本最好当天检测,若不能当天检测,推荐直接冻存组织,而不是组织匀浆。

样本切忌反复冻融,建议收集样本之后,分装冻存,避免样本反复冻融。

 

2.生化酶标板可以用普通板子替代吗?

答:常规可见光检测样本可以用实验室中普通的96孔板代替,室温放置即可,避免污染;

注:荧光法使用的全黑96孔板和紫外专用96孔UV板是专用且不可拆卸的,也不能用普通的96孔板代替。

 

3.样本如何稀释或者浓缩?

答:样本测定值若超出检测范围,可以将样本用生理盐水、PBS或指定的稀释液稀释后重新测定。一般稀释倍数从小到大,按照2倍,5倍,10倍,20倍…的顺序稀释,然后预实验确定一个合适的稀释倍数;

样本测定值若低于检测范围,蛋白样本可以使用超滤管进行浓缩,其他样本可使用冷冻真空浓缩仪提高样本浓度后再进行测定。

 

4.如何进行样本匀浆呢?

答:手工匀浆:将含匀浆介质的样本倒入玻璃匀浆管中,上下转动研磨数十次(6-8分钟),使组织匀浆化。

机械匀浆:用组织匀浆机,在冰水浴条件下研磨制成组织匀浆,皮肤、肌肉组织及植物组织等可适当延长匀浆时间。

超声破碎:用超声粉碎机进行粉碎,可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14 um超声处理30秒使细胞破碎;也可用国产超声波发生仪,用40A,5 s/次,间隙10 s反复3-5次。

反复冻融:适用于细胞样本,即用低渗液或双蒸水重悬细胞,再将细胞悬液进行“低温冷冻-室温融化-低温冷冻”循环,重复3次左右。

 

5.标准品或样品不显色?如何解决?

答:样本中确实不含有该指标或者指标含量太低,可查阅相关文献确定该样本中是否含有待检测指标;

样本保存不当,导致样本失活或提取方法不当未成功提取待检测物质等,建议尽可能使用新鲜样本以达到最佳实验效果,或者-80度保存;

样本前处理不当使用了导致酶失活的化学试剂等,例如:贴壁细胞不能进行胰酶消化,可能导致待测定目标酶活性受到影响,可采用直接刮取的方法;

试剂保存不当,包括保存温度、放置太久过期等,导致试剂盒中某些试剂失效。根据说明书建议给予产品最佳保存条件,Abbkine产品可保质一年。

 

6.检测数据与文献报道或者实验室此前测定数据结果差异大?

答:样品本身的影响:同一指标在不同样品,同一样品不同发育阶段或者不同环境下,其浓度或酶活会发生非常大的变化;

测定方法的影响:同一指标因为测定方法不同,检测结果会出现较大的差异,与文献对比时,应注意文献的检测方法、培养和处理条件及计算公式、单位、单位的定义等;

操作和仪器设备的影响:操作者取样习惯、匀浆程度和外部检测环境等都会对检测结果有很大影响。不同仪器设备的检测限和稳定性也会有一定影响;

与其他文献检测结果比较时,应比较实验组与对照组的数据差异性和变化趋势,而不是检测结果的数值。

 

7.为什么同一样本平行测定结果差异大(复孔差异大)?

答:样本原因:样本体系不均匀、样本提取时离心不完全、杂质等原因;

仪器原因:仪器不稳定造成系统误差大,一般仪器需要预热30分钟后再进行比色检测;

操作原因:由于操作不熟练,加样和加液手法问题,造成平行结果差异大。

 

8.要不要做标曲?试剂盒中有要求需要做标曲的,能否不做标曲直接采用说明书上的?标曲不过原点怎么办?

答:不可以自己不做标曲就直接用说明书上的标曲计算样本值,因为实验室的环境、仪器设备、实验人员、操作手法都不一样,需要自行做标曲。

所做的标曲跟说明书上的不太一样,标曲不过原点,主要是在做标曲时,没有用浓度与绝对OD值作图导致的。绝对OD值是用不同浓度标准品的OD值减去浓度为0的标准品OD值。

 

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