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干货 | 细胞增殖多维检测,寻找做细胞增殖的你

发布时间:2021年11月17日 浏览次数:323

当我们做细胞实验,包括:药物筛选、病毒转染、疾病模型、靶细胞杀伤实验,细胞增殖状态的定性和定量,成为细胞学研究伙伴们地不二之选。

当我们需要对增殖细胞进行准确定量,那么CCK8将会在电子耦合试剂存在的情况下,可以为线粒体内的活性脱氢酶验明正身;

当我们需要观察增殖细胞形态并定量,那么EdU代替大腕胸腺嘧啶出演武打戏的戏码(合成DNA), 然后曝光在媒体的镁光灯(免疫荧光、流式细胞术检测)下,进入我们的视野。

当然,对于研究细胞增殖,还有众多的兄弟姊妹共同上阵,现在我们来对它们进行一个详细的比较吧。

细胞增殖八种方法比较

类型 方法 优点 缺点
直接计数法 利用计数板或计数仪得出细胞的数目 简单,省钱,试剂和仪器普通,结果准确 不适合样品数量多的情况,不适合评估特定的亚群
3H-TdR渗入法 同位素3H标记的TdR作为DNA合成的前体掺入DNA合成过程,从而被液体闪烁计数器检测到。 3H-TdR掺入法敏感性高,客观性强,重复性好。 需变性或酶切DNA才可以孵育抗体;变性条件可能破坏细胞、组织形态;实验步骤繁琐;有一定细胞毒性,不适合长期活体研究。
Brdu检测法 BrdU代替胸腺嘧啶合成DNA,并用荧光标记。 经抗原抗体反应可放大信号,可结合其他标记进行同步研究。 需变性或酶切DNA才可以孵育抗体;变性条件可能破坏细胞、组织形态;实验步骤繁琐;有一定细胞毒性,不适合长期活体研究。
EdU检测法 EdU代替胸腺嘧啶合成DNA,并用荧光标记。 利用Click反应可以快速进行检测,不依赖于抗体,不需变性DNA,同样适合多重标记分析。步骤简单 具有较强的细胞毒性,不适合长期活体研究。
MTT检测法 活性脱氢酶将黄色的MTT分解成蓝紫色的水不溶性的甲瓒,并沉积在活细胞中,死细胞无此功能。DMSO能溶解细胞中的甲瓒,在490nm波长处测定其光吸收值 受药物本身的颜色、培养基的颜色、血清的浓度使结果的变异较大 价格便宜,使用广泛。
CCK-8检测法 MTT的升级版,细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。 CCK-8生成的formazan是水溶性的,不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤,因此可以减少一定的误差。重复性优于MTT;对细胞毒性小;为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。 CCK-8价格相对于MTT,比较昂贵
CFSE检测法 一种可穿透细胞膜的荧光染料,可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上,是一种良好的细胞标记物。 荧光信号强,细胞毒性低。通常用于长时程追踪细胞的增殖状况(或者细胞示踪),并且兼容活体动物实验。 最终的数据采集,需要借助流式细胞仪。而数据分析,也需要使用特殊的带有增殖分析功能的软件来拟合曲线。
核抗原Ki‐67染色法 Ki-67染色,研究人员可以评估处于细胞周期所有活跃期的总增殖细胞的百分比。 类似石蜡切片、冰冻切片等已经失去活性的样本,就只能利用免疫染色的方法来观察活跃增殖分子标记 对固定细胞进行观察。

细胞增殖会产生诸多重要改变,包括 DNA 的合成、细胞代谢增加、增殖特异性蛋白的表达等。基于新一代 AbFluor ™ 荧光染色技术,Abbkine 开发出能直接从 DNA 水平精准检测细胞增殖状态的EdU试剂盒(货号KTA2030KTA2031);同时,还开发出通过细胞代谢水平实现高通量检测细胞增殖状态的CCK8试剂盒(货号KTA1020KTC011001)。基于以上原理,我们应广大客户的需要,我们还开发出细胞增殖检测鸡尾酒套装(货号KTD103-CN),包含经专利设计的细胞毒性阳性对照品,可完美解决目前增殖检测结果的非标准化问题。

Fig.1 HEK293 and L929 cells in the positive control group were induced by cytotoxicity inducer for 30 min, while the control group was not given any treatment. Enhanced Cell Counting Kit-8 (CCK-8) was used to detect the cytotoxicity of HEK293 and L929 cells after cytotoxicity induction.

Fig.2 Cell Proliferation EdU Image Kit (Green Fluorescence) was used to detect the cytotoxicity of HEK293 cells after cytotoxicity induction.

功能合并后的细胞增殖检测鸡尾酒套装的优势如下:

  • 1.细胞增殖研究的标准化解决方案:经专利设计的细胞毒性阳性对照品,可完美解决目前增殖检测结果的非标准化问题;
  • 2.通用型凋亡检测套装:可直接准确地检测细胞增殖状态,也可选择高通量检测,覆盖了绝大多数细胞增殖 / 毒性检测的需求。

如图所示,细胞增殖检测鸡尾酒套装组分设计巧妙,可见一斑:

上述两大类方法,均是在活细胞、活组织中进行的。但如果面对的是类似石蜡切片、冰冻切片等已经失去活性的样本,就只能利用免疫染色的方法来观察活跃增殖分子标记了。目前最受欢迎和认可的增殖标记是Ki-67(货号ABM40064)(标准命名MKI67,marker of proliferation Ki-67),这个分子标记同时也是多种癌症病理诊断指标之一,下图为下图为人子宫癌组织的Ki-67免疫组化染色。在胞浆胞核和质膜上均有表达。

此外,PCNA(proliferating cell nuclear antigen,货号A01040)也是常用的活跃增殖标记。它在细胞核中稳定表达,也常常运用于WB细胞核内参抗体。

值得一提的是,CFSE染料(5(6)-CFDA, SE ,货号BMD00066)也是检测细胞增殖的良好标记物,它进入细胞后,可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时,CFSE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一。在一个增殖的细胞群中,各连续代细胞的荧光强度呈对递减,利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。

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产品名称 应用 货号 规格
【CCK8】细胞增殖/毒性检测试剂盒 细胞增殖/毒性检测 KTA1020 200T/1000T/10000T
乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒 细胞增殖/毒性检测 KTA1030 96T/480T
细胞增殖成像分析试剂盒(EdU法)(绿色荧光) 细胞增殖/毒性检测 KTA2030 50T/100T/500T
细胞增殖成像分析试剂盒(EdU法)(橘红色荧光) 细胞增殖/毒性分析 KTA2031 50T/100T/500T
PCNA小鼠单克隆抗体(1D7) IF, IHC-P, WB A01040 50 μL/200 μL/200 μL×5
细胞增殖标志物Ki67 单克隆抗体 IHC-P, IF ABM40064 30 μL/100 μL/200 μL
5(6)-CFDA, SE 细胞增殖体外检测/体内示踪 BMD00066 50mg/100mg

 

 

细胞和蛋白研究工具(Cell and protein research tools)

Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

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