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Abbkine带你了解细胞增殖检测的方法!

发布时间:2021年10月20日 浏览次数:382

细胞增殖是指细胞分裂引起的细胞数量增加,是细胞的重要生理功能之一。细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。真核细胞增殖的主要特征为遗传物质的复制和细胞的代谢增强。监测细胞群的生长速率对细胞的状态研究很有必要,比如肿瘤组织中可检测到不受控制的细胞增殖活动。

根据细胞增殖的不同特征和原理,常见的细胞增殖/毒性检测方式有:

1.通过检测增殖蛋白活跃度

通过检测细胞增殖相关的蛋白,判定细胞的增殖情况。Ki67、PCNA等均为细胞增殖相关的蛋白,主要用于检测 G1 后期和 S 期细胞的免疫测定,尤其Ki67的应用已经较成熟地应用于临床。采用IHC的方法检测Ki67的表达水平,可直接有效地判别肿瘤细胞的增殖活性。因此,Ki67是分析恶性肿瘤生长速度、发展速度、恶性程度高低的一个标准,Ki67百分率越高,说明肿瘤生长的速度越快、恶性程度越高。

2.四唑盐进行代谢活性检测

通过添加四咪唑盐到细胞中可进行线粒体内酶代谢活性的测定。活细胞能将四咪唑盐还原成有色的甲瓒或甲瓒盐(Formazan),可通过分光光度计或酶标仪进行检测。MTT、XTT、CCK-8法均为运用此原理检测细胞的增殖。

CCK-8试剂盒中的WST-8化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基 苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐,它在电子载体1-Methoxy PMS的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。基于CCK-8的试剂盒能高度准确地检测细胞增殖,比MTT法及XTT法的灵敏度高得多,能检测更低的细胞数目。该试剂盒可适用于96孔板培养的贴壁或悬浮细胞,且操作更简便,1 h左右即可完成实验,且对细胞毒性较小。但CCK-8是间接的方法,反应的是细胞活性而非是否在增殖。

3.根据DNA的合成检测细胞的增殖/毒性

DNA的新组装合成是细胞生长的必要条件,故经常被用来进行细胞增殖、细胞活力及凋亡的检测。BrdU及EdU都是胸腺嘧啶的非放射性类似物,能掺入增殖细胞的DNA中,可通过对BrdU及EdU的检测,从而对DNA的合成量进行测定。该类方法能直接地检测细胞增殖情况,是最准确可靠的检测方法。其中,EdU法使用“点击”化学法,通过乙炔基与荧光叠氮化物共价交联,不需要添加检测抗体,无需对DNA进行变性处理,被检测的细胞可以进行后续实验。

细胞增殖检测的方法令人眼花缭乱,用户需根据实验的实际情况和科研需求进行选择最合适的方法。

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