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Abbkine带你全面了解细胞状态检测!

发布时间:2021年09月02日 浏览次数:339

在细胞生长、增值、迁移、凋亡的各阶段中,细胞会受到许多因素的严格调控,这是一个复杂而动态的过程,因此对于细胞状态的检测尤为重要。

1.细胞增殖

细胞增殖是活细胞的重要生理功能之一,是生物体的重要生命特征,是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。细胞增殖是指细胞在周期调控的因子下,通过DNA复制等反应,完成细胞分裂的过程。增殖检测一般是分析分裂中的细胞数量的变化,进而反应细胞的生长状态及活性,细胞增殖检测主要分为四类:DNA合成检测、代谢活性检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP浓度检测

(1)CCK8检测

CCK8为MTT 法的替代方法,是一种基于WST(水溶性四唑盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂,可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验。

其原理是:WST-8被细胞中的脱氢酶还原而生成橙色产物(甲瓒),可溶于组织培养基中。细胞中脱氢酶产生的甲瓒产物的量与活细胞的数量成正比。

优点:高灵敏,无放射性,无毒;溶液稳定,重复性好;适合大规模,高通量的检测。

(2)EdU检测法

EdU(5-乙炔基-2‘-脱氧尿苷)是一种新型胸苷类似物,在DNA合成期间掺入新合成的DNA中。

其原理是:EdU上的乙炔基与荧光标记的小分子叠氮化物探针通过一价铜离子的催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,该反应非常迅速,被称作点击反应,30分钟完成。新合成的DNA被相应的荧光探针标记,然后可以进行检测。

优点:传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法需要DNA变性,抗原修复,抗原抗体过夜孵育,操作步骤复杂繁琐,而EdU检测无需使用抗体,操作便捷,无需DNA变形,可以保持细胞形态和DNA完整性,简单高效的点击反应。

2.细胞衰老

细胞衰老是细胞周期调控下多基因参与的复杂的生理病理过程,具有一定的可控性。细胞衰老被认为是一种抑癌机制,也是生物衰老的潜在原因之一。

主要检测方法:β-半乳糖苷酶检测

原理:衰老时,衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal) 在pH 6.0环境中活性上调,从而可以对衰老细胞或组织进行检测。在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。SA-β-Gal 仅存在于衰老细胞中,而在衰老前的静止期,肿瘤细胞或永生细胞中检测不到。

3.细胞毒性

细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里,其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性,就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标,并被广泛用于细胞毒性检测。

主要检测方法:LDH毒性分析

其原理是:LDH 催化乳酸生成丙酮酸和NADH,NADH 通过电子载体可将四唑盐MTT还原成甲臜产物,该还原形式在565 nm处表现出最大吸收且吸光度与LDH 的量呈正比,利用此原理可以测定死细胞和受损细胞的数量。

4.细胞凋亡

(1)Annexin V 凋亡检测

原理:Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca依赖性磷脂结合蛋白,正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine, PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V作为一种磷脂结合蛋白,与PS有高度亲和力,它通过细胞 外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。

(2)线粒体膜电位分析试剂盒(JC-1)

JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位,线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。

原理:在线粒体膜电位较高时,JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中,形成聚合物(J-aggregates),可以产生红色荧光(Ex/Em = 585/590);在线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体的基质中,此时JC-1为单体(monomer),可以产生绿色荧光(Ex/Em = 510/527 nm)。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。

(3)Caspase活性检测

Caspase半胱氨酸蛋白酶家族引发的级联反应是细胞凋亡过程的中心环节,其激活主要包括线粒体依赖途径和死亡受体介导的信号转导途径。

原理:激活后的下游 Caspase,通过切割特异性底物,导致细胞凋亡。Caspase的活化是导致细胞凋亡的中心环节,细胞凋亡功能的抑制将导致肿瘤的发生及免疫功能的异常,而细胞凋亡功能亢进与组织损伤和器官功能衰竭的发病密切相关。

(4)TUNEL凋亡检测

细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3‘-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧尿苷三磷酸核苷酸(dUTP)和荧光素形成的衍生物标记到DNA的3’-末端,从而可进行凋亡细胞的检测,称为TUNEL法。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3‘-OH形成,很少能够被染色。由此,TUNEL是检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。

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产品名称 货号 规格
【CCK8】细胞增殖/毒性检测试剂盒 KTA1020 200/1000/10000T
乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒 KTA1030 96/480T
细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒 KTA3030 100T
TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光) KTA2010 20/50/100T
TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(橙色荧光) KTA2011 20/50/100T
Annexin V-AbFluor™ 488 细胞凋亡检测试剂盒 KTA0002 20/50/100T
Caspase-3 活性分析试剂盒 (比色法) KTA3022 20/50/100T

 

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