超越BrdU，新一代细胞增殖成像分析试剂盒（EdU法）

1.EDU是什么？

EdU的中文名称为5-乙炔基-2′-脱氧尿苷，是胸腺嘧啶核苷的核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在合成的DNA分子中，用于 DNA 合成。广泛应用于细胞增殖等实验方面的研究。

2.BrdU是什么？

BrdU的中文名称为5-溴-2’-脱氧尿嘧啶核苷，BrdU 是胸苷的一种合成胸腺嘧啶类似物，在有丝分裂的 S 期会掺入到新合成的基因组 DNA 中。随后进行 DNA 变性，通过细胞染色来确定 BrdU 插入情况以及任何其他细胞表面和/或感兴趣的胞内目标物。

3.Edu的检测原理

EdU可以在DNA合成过程中替代胸苷掺入到新合成的DNA中。据报道EdU作为BrdU的替代物,在DNA复制过程中，EdU很容易掺入细胞DNA中，并在细胞核中积累。EdU的成功结合代表了炔基标签足够小的益处。另一方面，EdU上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针(如Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等)通过一价铜离子（由还原剂维生素C还原Cu2+所得）的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应(Click reaction)。如下图所示：

EdU标记细胞中的DNA及反应原理图

4.EDU的优势

EDU和BrdU都作为检测细胞增殖的方法，这两者有什么区别吗？

（1）采用传统的免疫荧光染色（BrdU）检测细胞增殖的方法需要DNA变性，抗原修复，抗原抗体过夜孵育，操作步骤过多且复杂。并且由于BrdU抗体分子较大，嵌入DNA分子中的BrdU无法直接与BrdU抗体结合，必须先进行DNA变性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但变性的程度可能导致错误结果。如果变性不充分，会导致BrdU难以暴露，无法检测，而且变性过程从边缘向中间渗透，会导致细胞核DNA的变性不均匀，边缘模糊不清。如果变性过分，则会导致DNA断裂，甚至降解，导致核染不均一。另外，不同抗体试剂公司的抗体质量不一致且所使用的抗体，有时会和其它目的蛋白基于抗体的检测相互产生干扰，造成难以确保实验重复性，且容易产生假阳性结果，其影响因素较多，稳定性比较差。与BrdU方法相比，EdU检测细胞增殖方法不需要DNA变性，不需要抗原修复，不需要抗原抗体反应。

（2）EdU细胞增殖方法简单，灵敏，方便，快速，准确，无需DNA变性，能够与各种抗体或荧光蛋白同时标记，以检测细胞其他性状特征，是细胞增殖检测的最佳选择。

（3）EdU细胞增殖检测可以直接并准确地检测出新DNA的合成。这种检测不仅能够测定单个细胞的增殖，还可以通过任何平台检测出细胞、组织或整个有机体中的增殖细胞。

Abbkine创新开发了基于EdU掺入和后续的点击反应的EdU法：

试剂盒组分如下：

结果展示:

KTA2030成像：Hela细胞（绿色）	KTA2031成像：Hela细胞（红色）

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