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超越BrdU,新一代细胞增殖成像分析试剂盒(EdU法)

发布时间:2022年04月28日 浏览次数:1030

1.EDU是什么?

EdU的中文名称为5-乙炔基-2′-脱氧尿苷,是胸腺嘧啶核苷的核苷类似物,其连有的炔烃基团在天然化合物很少见,能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中,用于 DNA 合成。广泛应用于细胞增殖等实验方面的研究。

2.BrdU是什么?

BrdU的中文名称为5-溴-2’-脱氧尿嘧啶核苷,BrdU 是胸苷的一种合成胸腺嘧啶类似物,在有丝分裂的 S 期会掺入到新合成的基因组 DNA 中。随后进行 DNA 变性,通过细胞染色来确定 BrdU 插入情况以及任何其他细胞表面和/或感兴趣的胞内目标物。

3.Edu的检测原理

EdU可以在DNA合成过程中替代胸苷掺入到新合成的DNA中。据报道EdU作为BrdU的替代物,在DNA复制过程中,EdU很容易掺入细胞DNA中,并在细胞核中积累。EdU的成功结合代表了炔基标签足够小的益处。另一方面,EdU上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针(如Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等)通过一价铜离子(由还原剂维生素C还原Cu2+所得)的催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,该反应非常迅速,被称作点击反应(Click reaction)。如下图所示:

EdU标记细胞中的DNA及反应原理图

4.EDU的优势

EDU和BrdU都作为检测细胞增殖的方法,这两者有什么区别吗?

(1)采用传统的免疫荧光染色(BrdU)检测细胞增殖的方法需要DNA变性,抗原修复,抗原抗体过夜孵育,操作步骤过多且复杂。并且由于BrdU抗体分子较大,嵌入DNA分子中的BrdU无法直接与BrdU抗体结合,必须先进行DNA变性操作才能使BrdU抗原表位暴露,但变性的程度可能导致错误结果。如果变性不充分,会导致BrdU难以暴露,无法检测,而且变性过程从边缘向中间渗透,会导致细胞核DNA的变性不均匀,边缘模糊不清。如果变性过分,则会导致DNA断裂,甚至降解,导致核染不均一。另外,不同抗体试剂公司的抗体质量不一致且所使用的抗体,有时会和其它目的蛋白基于抗体的检测相互产生干扰,造成难以确保实验重复性,且容易产生假阳性结果,其影响因素较多,稳定性比较差。与BrdU方法相比,EdU检测细胞增殖方法不需要DNA变性,不需要抗原修复,不需要抗原抗体反应。

(2)EdU细胞增殖方法简单,灵敏,方便,快速,准确,无需DNA变性,能够与各种抗体或荧光蛋白同时标记,以检测细胞其他性状特征,是细胞增殖检测的最佳选择。

(3)EdU细胞增殖检测可以直接并准确地检测出新DNA的合成。这种检测不仅能够测定单个细胞的增殖,还可以通过任何平台检测出细胞、组织或整个有机体中的增殖细胞。

EDU BrdU
检测分子 很小
检测方式 化学反应 免疫反应
DNA变性 不需要 需要
影响其他标记
实验时间 2小时左右 过夜
检测敏感度 灵敏 一般

Abbkine创新开发了基于EdU掺入和后续的点击反应的EdU法:

产品名称 货号 荧光特性
EdU法细胞增殖成像分析试剂盒(绿色荧光) KTA2030 AbFluor 488

Ex/Em = 501/525 nm

EdU法细胞增殖成像分析试剂盒(橙色荧光) KTA2031 AbFluor 545

Ex/Em = 546/565 nm

试剂盒组分如下:

试剂盒组分 试剂盒优势
• EdU(10 mM)

• AbFluor 488和545 叠氮化物

• 10×反应缓冲液

• 含铜试剂

• 还原剂

• 无须抗体

• 无变性步骤,保持细胞形态和DNA完整性

• 简单,可靠,省事的创新方法

• 专利的AbFluor 488和545 azide具有良好的光稳定性与抗淬灭性

• 针对荧光显微镜进行优化

结果展示:

KTA2030成像:Hela细胞(绿色) KTA2031成像:Hela细胞(红色)

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货号 名称 规格 价格
KTA2030 EdU法细胞增殖成像分析试剂盒(绿色荧光) 100T/500T 698/1516
KTA2031 EdU法细胞增殖成像分析试剂盒(橙色荧光) 100T/500T 698/1516
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