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干货|一眼就让人爱了爱了的各色荧光染料合集

发布时间:2022年09月08日 浏览次数:88

在实验中,为了能够清楚地观察到目标组织或细胞,通常会采用染色的方式进行直观验证。面对形态各异的组织和细胞,研究学者们想到了多种多样的染色方法以佐证自己的实验结果。但是实际操作中也会遇到各种各样的的困难:

  1. 选购的染料类不符合染色的细胞区域和应用类型;
  2. 历经数月/年保存下来的样本形式不符合预期染色实验的要求;
  3. 实验仪器不符合荧光染料的拍摄要求,导致样本和染料的浪费;
  4. 染料的配色不准确,导致不能实现细胞的多方位染色。

通常,细胞染色类型主要分为如下五大类,对应的染料类型如下:

染色类型 染料类型
细胞核染色 核染料
胞浆染色 胞浆染料
胞膜染色 膜染料
细胞示踪染色 细胞示踪染料
区室和细胞器染色 细胞器染料

 

分类 品名 货号 描述
 

 

 

核酸染料

Ethidium Homodimer-1 (EthD-1) BMD0060 溴乙啡锭二聚体是一种红色的高亲和性荧光核酸染料,检测溶液中或者解体细胞中的核酸(DNA/RNA),不能穿过活细胞膜。
Hoechst 33258 BMD0061 细胞核染色(DNA) 一般是细胞固定后再染色。
Hoechst 33342 BMD0062 细胞核染色(DNA)毒性更小,可活细胞直接染色。
DAPI BMD0063 4',6-二脒基-2-苯基吲哚是细胞核染色(DNA)。
细胞质染料 Calcein AM BMD0064 活细胞染色
5(6)-CFDA/5(6)-CFDA, SE BMD0066 可对活细胞进行荧光标记的细胞示踪染料,不仅可用于细胞增殖的体外实验,还可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程(酯酶活性)。
 

 

细胞膜染料

DiI (DiIC18(3)) BMD0071 橙色,亲脂性膜染料
DiO(DiOC18(3)) BMD0072 绿色,亲脂性膜染料
DiD (DiIC18(5)) BMD0073 红色,亲脂性膜染料
DiR (DiIC18(7)) BMD0074 深红色,亲脂性、近红外膜染料,配合其他多色使用
示踪染料 Live Cell Tracking Kit KTA1002 对活细胞示踪,记录细胞的生长、分裂和移动等活动
区室细胞器染料 TraKine™线粒体染色试剂盒 KTC4003KTC4004 线粒体染色
 TraKine™F-actin染色试剂盒及其染料 KTC4008/9,BMD0082/83/84 细胞骨架染色

 

TraKine™ Pro 活细胞微管染色试剂盒(红色、绿色) KTC4100KTC4110 活细胞微管探针
TraKine™ Pro 活细胞溶酶体染色试剂盒(红色、绿色) KTC4200KTC4210 活细胞溶酶体探针

 

而样本制备对于细胞染色效果也是至关重要,如下为四种样本类型的主要处理方法:

1.对于贴壁细胞,有2种方法:

先将洁净的盖玻片在70%乙醇中进行浸泡处理,然后用干净无菌的镊子放置到培养皿中,用无菌 PBS洗去残留的乙醇。待细胞接近长成单层后取出盖玻片,操作小心,防止细胞脱片(可用多聚赖氨酸浸泡盖玻片)。

将细胞在培养皿或者孔板内铺板,控制细胞生长密度后进行染色。

 

2.对于悬浮细胞,有2种方法:

先在悬浮液中进行固定步骤,然后把细胞滴加在载玻片上,干燥后细胞会紧贴在载玻片上。

先在悬浮液中进行固定和染色步骤,离心洗脱,然后用移液管移至盒式玻片进行后续染色步骤。

 

3.对于冷冻切片:切片放置在载玻片上后,可以直接进行固定等后续操作。

4.对于石蜡切片:免疫荧光中石蜡切片较少,要先进行脱蜡和抗原修复处理。

 

不同染料对仪器类型的选择性也是千差万别的,如下为细胞染色实验的常用仪器:

为了实现细胞的多方位染色,我们常常需要进行多种染料的配合染色,其中最为经典的是细胞器与细胞核染料的多重染色,如下图所示:

 

Q1: TraKine™ Pro活细胞微管染色试剂盒(绿色荧光)与Hoechst 33342配合染色:

  1. Hoechst 33342与该染料可以配合使用,且都几乎无毒性,不影响细胞存活;
  2. 这个tubulin-green 染料荧光是比较稳定的,荧光激发累计时长可以到达350s以上,拍200帧以上的图片。 Hoechst 33342的稳定性更高一些。

 

Q2: Trakine™ pro染料是否可以和普通的染料一起染?是否会影响探针透膜?如果可以,建议染色顺序怎样,染色步骤是否需要调整?

Trakine™ pro探针可以和普通探针一起染色,但针对需要用到buffer的探针,要先孵育需要用到buffer的探针,再孵育其它探针。针对不需要buffer的透膜探针,可以和客户想用的其它探针一起孵育。

总结:当想要两个或三个探针共标一个细胞的时候,所有用到buffer的探针可以一起先孵育(可共用buffer),自身透膜的探针后孵育。

 

细胞染色技术还有很大的发展空间,将来会应用到更多的实验领域,在生物行业发展中具有举足轻重的地位,正持续获得越来越多生物学家的关注。

abbkine的技术专家为了给广大读者提供学习生物知识的平台,经过不懈努力,将多种高端生物实验的干货整理出来,后期陆续在微信公众号中刊登,请广大热爱科学的读者持续关注Abbkine公众号。

 

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