干货|一眼就让人爱了爱了的各色荧光染料合集

在实验中，为了能够清楚地观察到目标组织或细胞，通常会采用染色的方式进行直观验证。面对形态各异的组织和细胞，研究学者们想到了多种多样的染色方法以佐证自己的实验结果。但是实际操作中也会遇到各种各样的的困难：

1. 选购的染料类不符合染色的细胞区域和应用类型；
2. 历经数月/年保存下来的样本形式不符合预期染色实验的要求；
3. 实验仪器不符合荧光染料的拍摄要求，导致样本和染料的浪费；
4. 染料的配色不准确，导致不能实现细胞的多方位染色。

通常，细胞染色类型主要分为如下五大类，对应的染料类型如下：

而样本制备对于细胞染色效果也是至关重要，如下为四种样本类型的主要处理方法：

1.对于贴壁细胞，有2种方法：

先将洁净的盖玻片在70%乙醇中进行浸泡处理，然后用干净无菌的镊子放置到培养皿中，用无菌 PBS洗去残留的乙醇。待细胞接近长成单层后取出盖玻片，操作小心，防止细胞脱片（可用多聚赖氨酸浸泡盖玻片）。

将细胞在培养皿或者孔板内铺板，控制细胞生长密度后进行染色。

2.对于悬浮细胞，有2种方法：

先在悬浮液中进行固定步骤，然后把细胞滴加在载玻片上，干燥后细胞会紧贴在载玻片上。

先在悬浮液中进行固定和染色步骤，离心洗脱，然后用移液管移至盒式玻片进行后续染色步骤。

3.对于冷冻切片：切片放置在载玻片上后，可以直接进行固定等后续操作。

4.对于石蜡切片：免疫荧光中石蜡切片较少，要先进行脱蜡和抗原修复处理。

不同染料对仪器类型的选择性也是千差万别的，如下为细胞染色实验的常用仪器：

为了实现细胞的多方位染色，我们常常需要进行多种染料的配合染色，其中最为经典的是细胞器与细胞核染料的多重染色，如下图所示：

Q1: TraKine™ Pro活细胞微管染色试剂盒（绿色荧光）与Hoechst 33342配合染色：

1. Hoechst 33342与该染料可以配合使用，且都几乎无毒性，不影响细胞存活；
2. 这个tubulin-green 染料荧光是比较稳定的，荧光激发累计时长可以到达350s以上，拍200帧以上的图片。 Hoechst 33342的稳定性更高一些。

Q2: Trakine™ pro染料是否可以和普通的染料一起染？是否会影响探针透膜？如果可以，建议染色顺序怎样，染色步骤是否需要调整？

Trakine™ pro探针可以和普通探针一起染色，但针对需要用到buffer的探针，要先孵育需要用到buffer的探针，再孵育其它探针。针对不需要buffer的透膜探针，可以和客户想用的其它探针一起孵育。

总结：当想要两个或三个探针共标一个细胞的时候，所有用到buffer的探针可以一起先孵育（可共用buffer），自身透膜的探针后孵育。

细胞染色技术还有很大的发展空间，将来会应用到更多的实验领域，在生物行业发展中具有举足轻重的地位，正持续获得越来越多生物学家的关注。

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