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IFKine™ 荧光二抗科研成果速递及免疫荧光干货集锦

发布时间:2021年03月11日 浏览次数:525

IFKine™ 是具有最新型荧光基团和经过特殊优化处理的系列二抗产品,具有更强的亮度,光稳定性, 更低的非特异性杂交以及背景。最新一代的IFKine™ 荧光染料基团确保了最佳的荧光性能,驴来源和经过其它物种血清吸附的特点,使IFKine™ 荧光二抗成为荧光染色的理想选择,尤其是在荧光多标实验!作为免疫荧光专用的荧光二抗, IFKine™ 荧光二抗在免疫荧光多标时,样本可能会产生与二抗的非特异性杂交, 另由于同时有多个一抗分子,因此一抗与二抗之间也有一定的非特异性结合。 使用经过样品种属血清吸附过的驴来源二抗, 可避免与样本的非特异性结合,以及与一抗的潜在交叉反应。目前使用 Abbkine的IFKine™ 荧光二抗已成为许多科研人员荧光染色的理想选择 。接下来让我们的小编带领大家看一篇2021年新鲜出炉的科研成果吧!除此之外,我们还为大家准备了一堆免疫荧光实验的相关干货,例如FAQ、免疫荧光双标和多标技术的研究方法操作要点以及注意事项,以供大家交流学习。

文献名称:Trpv4 regulates Nlrp3 inflammasome via SIRT1/PGC-1α pathway in a cuprizone-induced mouse model of demyelination

中文:在铜氮酮诱导的脱髓鞘小鼠模型中,Trpv4经由SIRT1 /PGC-1α途径调控Nlrp3炎性体

作者单位:徐州医科大学徐州神经生物学重点实验室

研究方向:细胞生物学与神经生物学系

杂志名称:Experimental Neurology (2020)

影响因子:4.6

背景越来越多的证据表明,含有3(Nlrp3)炎症小体的Nod样受体吡啶结构域在脱髓鞘疾病中被过度活化。已经暗示,瞬时受体电位4型(Trpv4)被认为是多峰离子型受体,其在包括炎症在内的多种病理状况中起重要作用。

目的:这项研究的目的是调查Trpv4通道是否调节脱髓鞘小鼠的corp体中的Nlrp3炎性体。

方法:

  1. 动物养殖和cuprizone处理;
  2. 慢病毒生产
  3. 组织学检测
  4. Luxol固蓝(LFB)染色
  5. 免疫荧光染色:A24411, A24311,A24421, A24221
  6. 透射电子显微镜
  7. 组织匀浆
  8. WB实验检测
  9. 免疫沉淀和PGC-1α乙酰化测定
  10. ROS 检测

结果:免疫荧光的双染的荧光的结果图片如下

CPZ激活的神经胶质细胞激活也增加了Nlrp3炎性小体和Trpv4的表达

CPZ激活的神经胶质细胞激活也增加了Nlrp3炎性小体和Trpv4的表达。

免疫荧光染色显示Ctrl和CPZ小鼠(n = 4)小胶质细胞和星形胶质细胞中Nlrp3和Trpv4表达,比例尺(左)= 100 μm;标尺(右)= 200 μm。

结论:circKIF4A-miR-375-KIF4A轴通过竞争性内源RNA(ceRNA)机制调节TNBC的进程。因此,circKIF4A可以作为TNBC的预后生物标志物和治疗靶标。

成果:本研究提供了证据,表明在CPZ诱导的脱髓鞘小鼠中,Trpv4通过SIRT1 /PGC-1α途径参与了线粒体功能障碍和Nlrp3炎性体激活。siRNA介导的Trpv4敲低可改善线粒体功能并抑制Nlrp3炎性小体活化,从而减轻脱髓鞘和行为障碍。 这项研究仅在体内进行,由于复杂的病理学和细胞间的相互作用,很难弄清准确的分子机制,应在体外进一步探索细胞机制。 此外,我们使用慢病毒来敲除Trpv4,最好使用条件敲除小鼠研究Trpv4的作用和机制。

Trpv4的作用和机制。

Abbikine产品:IFKine Red donkey anti-mouse IgG (A24411),  IFKine Green donkey anti-mouse IgG (A24311), IFKine Red donkey anti-rabbit IgG and IFKine (A24421),Green donkey anti-rabbit IgG(A24221) (1:500; Abbkine, USA)

 

对于免疫荧光实验,Abbkine的产品专家经过多年的实验经验,总结了以下几点免疫荧光FAQ:

Q:免疫荧光切片显微镜拍到形状不规则的亮点应该如何处理?
A:不规则且较多的亮点一般是因为玻片材质存在杂质或者是表面的灰尘,可以通过调整焦面到组织上来就可以避免。

Q:拍照过程中,通道切换的方法是怎样的?
A:先在白光下找到目标位置,并调到最清晰的焦距,再切换到荧光通道进行拍摄。

Q:如何避免染料褪色?
A:为了降低某些样品的褪色程度,建议在光照到达激发滤光器之前在光路中使用中性密度滤光片,从而减小激发光强度。在其他情况下,可以通过改变封固剂的pH或通过使用抗漂白剂来减少褪色效果。对于数字成像,显微照相或简单的视觉观察,快速改变视野也可以避免褪色效应。

Q:拍照过程中组织局部清晰,其它区域模糊是什么原因?
A:制作组织切片过程中,有局部区域在玻片上粘贴不牢固,有脱片倾向,导致样本不在一个焦面上,显微镜下呈现出模糊的影像。

Q:组织细胞无着色?
A:  一种情况是实验操作问题,包括实验操作方法不准确、实验材料不新鲜、抗体种属和反应性选择和抗体质量问题等,这些均可通过设置阳性对照以及阴性对照实验来排除。
第二种情况是蛋白表达问题,同上期讲的“WB实验无条带”一样,IF实验准备阶段也需要查阅大量资料,初步确认目的蛋白的时空表达谱(包含表达量、表达部位、刺激条件等)。

 

近年来,众多的科学家已经把目光聚焦到了免疫荧光双标和多标技术中,该项研究方法操作要点和注意事项,我们也总结起来分享给大家:

免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化,不同点如下:

1、免疫荧光不需要使用双氧水处理,封闭和一抗孵育与其相同。

2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育,孵育时间根据抗体的工作浓度确定。

3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。

4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油:0.01M PBS (1:1)。条件许可,建议购买抗淬灭的封片液,使标本可以保存更久。

5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。

6、荧光抗体染色假阳性可能会多,需要分别设定阳性和阴性对照。

 

为了广大“因粉”的厚爱,我们还会整理出更多的实验方法FAQ给大家学习和参考。同时,Abbkine的技术专家为了给广大读者提供学习生物知识的平台,经过不懈努力,将多种高端生物实验的干货整理出来,后期陆续在微信公众号中刊登,请广大热爱科学的读者持续关注Abbkine公众号。

Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

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