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免疫组化 - 如何运用Image J对免疫组化进行分析

发布时间:2021年06月16日 浏览次数:1415

上期我们介绍了如何通过Image J对免疫荧光信号强度进行分析,温故而知新,回顾传送们:如何运用image J对细胞荧光强度进行分析。

今天我们来介绍其在免疫组化方面的应用。Image J软件完全免费,下载方便。作为一名科研人,每天面对各种让人抓狂的实验数据,如果能熟练运用Image J,对我们的实验结果分析无疑时非常有帮助的。

下面咱们就来介绍如何通过Image J对免疫组化进行分析。以下图为例:

荧光细胞示例

 

第一步:导入图片:打开Image J,File→Open:打开要测量的图片

导入图片

 

第二步:转换图片格式:Image→Type→RGB Stack

转换图片格式

 

此时,图片下端出现滚动条,1、2、3档分别对应红、绿、蓝,选择相对于清晰的图片用于后续分析,这里我选择2档。

红绿蓝分档

红绿蓝分档


第三步:对染色区域进行标记:Image→Adjust→Threshold

对染色区域进行标记

 

出现Threshold界面,滑动下方两个滑块可以改变标记面积。

Threshold界面

标记区域

 

第四步:设置测量参数:Analyze→Set Measurements

设置测量参数

 

在弹出的测量参数设置选项框中,勾选需要的测量参数:Area(所框选区域面积);Mean(框选区域平均灰度值);IntDen(Integrated Density)(框选区域荧光总强度);Area fraction(面积占比),点击OK确认。

勾选测量参数

 

第五步:分析结果:Analyze→Analyze Particles,勾选按图所示勾选相应栏目

勾选分析栏目

勾选完成后点击OK,跳出对话框,选择否;

选否对话框

此提示为是否需要将3档的图片结果全部显示,我们这里只需要选中的二档就够了。

 

结果展示:

结果展示

此图为整体照片的分析,阳性面积百分比为3.658%;

照片分析,阳性面积百分比为3.658%

 

后面还有对图片内个体的分析↓↓↓

个体结果列表

 

第六步:整理数据,Edit→Copy,可以将数据拷贝到Excel表中

个体结果列表

整理到Excel

下面即可对所有数据进行分析。

以上,就是本期运用Image J对免疫组化进行分析的分享啦,最后也祝愿大家实验顺利~

 

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