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快Get,三分钟带你梳透免疫荧光的痛点!

发布时间:2022年04月21日 浏览次数:186

免疫荧光是免疫学实验中的一种常见实验,对于实验大咖来说,可能是洒洒水的功夫,一张“耀眼靓丽”的片子就出来了,但是对于操作新手来说,可能在整体流程中不太友好,仍旧会出现这样那样的状况,比如整个细胞片都出现荧光亮点,或者信号弱或无信号,染色细胞过少,又或者是观察视野里只有DAPI的蓝光,目的荧光几乎没有或者很弱。这样的话,可能就非常的令人抓马了。今天我们就一起来走进免疫荧光的世界,看看如何梳理自己的实验。

1.原理

免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及利用定量技术(比如流式细胞仪)测定含量。

2.应用场景

免疫荧光的实验应用范围极其广泛,可以测定内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肿瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。根据诊断类别,又可分为传染性疾病、内分泌、肿瘤、药物检测、免疫学、血型鉴定等。

3.实验步骤

免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透(或称为透化)、封闭、抗体孵育及荧光检测等。细胞片制备(通俗的说法是细胞爬片)是免疫荧光实验的第一步,细胞片的质量对实验的成败至关重要,原因很简单,如果发生细胞掉片,一切都无从谈起。

固定和通透步骤最重要的是根据所研究抗原的性质选择适当的固定方法,合适的固定剂和固定程序对于获得好的实验结果是非常重要的。免疫荧光中的封闭和抗体孵育与其它方法(如ELISA或Western Blot)中的相同步骤是类似的,最重要的区别在于免疫荧光实验中要用到荧光抗体,此外抗体浓度的选择可能更加关键。最后需要注意的是,标记好荧光的细胞片应尽早观察,或者用封片剂封片后在4℃或-20℃避光保存,以免因标记蛋白解离或荧光减弱而影响实验结果。

4.可能实验失误原因

(1)Eg-整个细胞片都出现荧光亮点?

原因可能是二抗浓度过高,可根据推荐的二抗稀释效价比,自行调整适当降低二抗浓度。

(2)Eg-信号弱或无信号,染色细胞过少?

可能是目标蛋白在细胞中没有表达,或者是表达目标蛋白的细胞过少,细胞通透性差。

(3)Eg-观察视野中只有DAPI的蓝光,目的荧光几乎没有或者很弱?

出现这种现象很有可能是抗体比例太低,需提高抗体浓度,可配合提高二抗浓度;共聚焦的激发荧光强度不够大。

 

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Part one:

IFKine™ 系列是具有最新型荧光基团和经过特殊优化处理的二抗产品,具有更强的亮度,光稳定性,更低的 非特异性杂交以及背景。最新一代的IFKine™ 荧光染料基团确保了最佳的荧光性能,驴来源和经过其它物种血清吸附的特点,使IFKine™ 荧光二抗成为荧光染色的理想选择,尤其是在荧光多标实验!

中文名称 货号 规格 价格
IFKine驴抗兔IgG二抗,绿色荧光标记(IF实验优化) A24221 100μl/500μl 498/1939
IFKine驴抗山羊IgG二抗,绿色荧光标记(IF实验优化) A24231 100μl/500μl 498/1939
IFKine驴抗小鼠IgG二抗,橙色荧光标记(IF实验优化) A24311 100μl/500μl 498/1939
IFKine驴抗小鼠IgG二抗,红色荧光标记(IF实验优化) A24411 100μl/500μl 498/1939
IFKine驴抗兔IgG二抗,红色荧光标记(IF实验优化) A24421 100μl/500μl 498/1939
IFKine驴抗山羊IgG二抗,红色荧光标记(IF实验优化) A24431 100μl/500μl 498/1939

Part two:

DyLight荧光染料是一种新型荧光染料,具有更强的荧光强度和更高的光学耐受性。Abbkine 提供全套的DyLight系列荧光二抗,以更高的特异性和多样性应用,满足您绝大多数类型的免疫实验分析需求。

产品特点与优势:

  • 易用型:优化的液体组分包装,简单易用
  • 高性价比:小包装试用性高,大包装满足更多需求
  • 高质量保证:非特异性背景极低,高特异性和灵敏度
  • 广泛的光谱选择:提供全套光谱从DyLight® 350 到DyLight® 80
中文名称 货号 规格 价格
山羊抗小鼠IgG二抗, 绿色DyLight 488荧光标记 A23210 100μl/500μl 298/1139
山羊抗兔IgG二抗, 绿色DyLight 488荧光标记 A23220 100μl/500μl 298/1139
兔抗山羊IgG二抗, 绿色DyLight 488荧光标记 A23230 100μl/500μl 298/1139
山羊抗大鼠IgG二抗, 绿色DyLight 488荧光标记 A23240 100μl/500μl 298/1139
山羊抗小鼠IgG二抗, 黄红色DyLight 549荧光标记 A23310 100μl/500μl 298/1139
山羊抗兔IgG二抗, 黄红色DyLight 549荧光标记 A23320 100μl/500μl 298/1139
兔抗山羊IgG二抗, 黄红色DyLight 549荧光标记 A23330 100μl/500μl 298/1139
山羊抗大鼠IgG二抗, 黄红色DyLight 549荧光标记 A23340 100μl/500μl 298/1139
山羊抗小鼠IgG二抗, 橙红色DyLight 594荧光标记 A23410 100μl/500μl 298/1139
山羊抗兔IgG二抗, 橙红色DyLight 594荧光标记 A23420 100μl/500μl 298/1139
兔抗山羊IgG二抗, 橙红色DyLight 594荧光标记 A23430 100μl/500μl 298/1139
山羊抗大鼠IgG二抗, 橙红色DyLight 594荧光标记 A23440 100μl/500μl 298/1139

 

 

 

细胞和蛋白研究工具(Cell and protein research tools)

Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

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