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免疫荧光专题|怎样才能让免疫荧光(IF)结果更出彩?

发布时间:2022年04月21日 浏览次数:265

说到免疫荧光,大家可能熟悉又陌生,它的原理和步骤读来朗朗上口,简单易懂,但是为什么操作过程中常常做不出清晰的结果呢?怎样才能让免疫荧光(IF)结果更出彩呢,这里面涉及的许多操作细节,影响着实验的成败:

  1. 当我们选择的荧光二抗信噪比低时,特异性荧光信号会受到干扰;
  2. 当我们使用的封闭液效果不好,会导致IF背景;
  3. 当我们使用的封片剂荧光兼容性不好,甚至无法抑制荧光淬灭时,完美的荧光信号也会在最终拍摄过程中大打折扣。

那么怎么样能把免疫荧光的结果做得清晰可见,让人信服呢?

首先,我们需要了解免疫荧光(IF)的基本步骤,IF实验按照抗体类型来分,可以分为间接免疫荧光和直接免疫荧光:

从以上图片,我们不难得知,间接免疫荧光虽然操作复杂,实验耗时一些,但是它的荧光信号由于受到一抗二抗的信号级联放大的影响,最终荧光信号的增强效果是比较强的。

由此,荧光二抗在这里体现出了不容小觑的作用,下面我们来盘点一下这些年Abbkine的特色荧光二抗:

1.免疫荧光专用:IFKine™ 血清吸附驴来源荧光二抗

IFKine™ 是具有最新型荧光基团和经过特殊优化处理的系列二抗产品,具有更强的亮度,光稳定性,更低的非特异性杂交以及背景。最新一代的IFKine™ 荧光染料基团确保了最佳的荧光性能,驴来源和经过其它物种血清吸附的特点,使IFKine™ 荧光二抗成为荧光染色的理想选择,尤其是在荧光多标实验!同时该系列荧光二抗被多篇高分文献广泛引用,说明其出类拔萃的使用效果受到了广大IF实验爱好者的强烈好评。

该产品的特点与优势:

  • 即用型:优化的液体组分包装,简单易用;
  • 选择全:小包装试用性高,大包装满足更多需求;
  • 适合荧光多标实验:驴来源的二抗产品,兼容多数一抗,便于封闭,避免潜在的交叉反应;
  • 非特异性反应极低:二抗经过经过其它物种血清吸附;
  • 卓越质量:更强的亮度,光稳定性,pH耐受性。

涉及的产品品目如下:

货号 名称 规格(μl) 价格(¥)
A24211 IFKine™ Green Donkey Anti-Mouse IgG 100/500 498/1938
A24221 IFKine™ Green Donkey Anti-Rabbit IgG 100/500 498/1938
A24231 IFKine™ Green Donkey Anti-Goat IgG 100/500 498/1938
A24311 IFKine™ Orange Donkey Anti-Mouse IgG 100/500 498/1938
A24411 IFKine™ Red Donkey Anti-Mouse IgG 100/500 498/1938
A24421 IFKine™ Red Donkey Anti-Rabbit IgG 100/500 498/1938

2.易用型DyLight™系列荧光二抗精彩呈现!

DyLight荧光染料是一种新型荧光染料,具有更强的荧光强度和更高的光学耐受性。 Abbkine 提供全套的DyLight系列荧光二抗,以更高的特异性和多样性应用,满足您绝大多数类型的免疫实验分析需求。

DyLight染料的吸收峰最大值可从350nm直到770nm,相对于Alexa Fluor,CyDye和LI-COR,DyLight染料在许多应用中表现出更高的荧光强度和抗淬灭性,并且在pH 4-9的广谱范围内仍能保持高荧光强度。此外,DyLight染料具有很好的水溶性,可以实现染料与蛋白质的高比例偶联,而不引起共轭物的沉淀。涉及的反应种属也比较完备,包括:小鼠、兔、大鼠、山羊等。同时该系列荧光二抗被多篇高分文献广泛引用,说明其出类拔萃的使用效果受到了广大IF实验爱好者的强烈好评。

其独特的优势如下:

  • 易用型:优化的液体组分包装,简单易用;
  • 高性价比:小包装试用性高,大包装满足更多需求;
  • 高质量保证:非特异性背景极低,高特异性和灵敏度;
  • 广泛的光谱选择:提供全套光谱从DyLight® 350 到DyLight® 800。

然后,为了避免免疫荧光实验产生背景,我们也在努力寻找封闭效果好的动物血清,什么样的血清才是优质的封闭血清呢?

封闭血清就是将养殖的正常动物采血,然后不加抗凝剂,血液凝固,血块收缩,析出的淡黄色液体。Abbkine特殊工艺:脂质萃取、透析。

补充说明一下,血清与血浆的区别:

血浆是指血液中除去细胞成分后剩下的淡黄色或无色半透明液体,一般需要经过抗凝处理 。血清与血浆的区别在于血清中不含某些在凝血过程中被消耗的凝血因子如纤维蛋白原,增添了在血液  凝固过程中由血管内皮细胞和血小板所释放的化学物质。

Abbkine优质封闭血清,其独特优势如下:

  • 高品质:正常的血清是从未免疫的正常成年宿主体内采集的血液,经脂质萃取和透析加工而成。血液采集和血清提取过程中采用专利技术,极大地避免了溶血的发生。
  • 用途广泛:IHC、ICC、IF、ELISA、BL。
  • 适用便捷:液体形式产品(原液),无需溶解,适用PBS直接稀释即可使用。
  • 质量稳定:在-20℃保存的话,一般都是可以放5年。对外承诺:2-3年肯定没问题。
  • 配方优良:与其它进口品牌比,减少了一倍的防腐剂含量,对细胞和蛋白的毒性/影 响更小。
  • 种属全:提供全套种属的封闭血清,满足绝大多数客户的需求。
  • 现货供应:大量现货储备,确保货期时效性。

相关产品推荐:

货号 名称 规格 价格(¥)
BMS0050 Normal Goat Serum 10ml/10ml*10 98/616
BMS0070 Normal Mouse Serum 10ml/10ml*10 716/4216
BMS0100 Normal Rat Serum 10ml/10ml*10 568/3568

 

免疫荧光IF的最后阶段,就是封片了,为了到达保持荧光状态的最佳效果,我们在原有增强型抗荧光淬灭剂的基础上,开发出了一款含DAPI的抗淬灭封片剂,集多种优势于一身:

  1. SuperKine™ 增强型抗荧光淬灭剂(含DAPI)用于对荧光组织和细胞样品的封片,添加DAPI,节约染DAPI的时间至少30分钟;
  2. 添加独有的抗荧光淬灭剂成分,兼容多种荧光染料(DAPI/FITC/Cy3/Cy5/Dylight 488/549/594/649等)可保护整个可见光谱和红外光谱,防止荧光信号淬灭;
  3. 样品封片后4℃或-20℃避光保存2周以上,仍可维持原有发光强度。

产品推荐:

货号 名称 规格 价格(¥)
BMU107-CN SuperKine™ 增强型抗荧光淬灭剂(含DAPI) 10ml 98
BMU104-CN SuperKine™ 增强型抗荧光淬灭剂 10ml 98

作为免疫荧光(IF)的资深选手,小编也曾经为IF实验夙兴夜寐,为此,小编总结了一系列切身感受的常见问题解答FAQ

Q:免疫荧光切片显微镜拍到形状不规则的亮点应该如何处理?
A:不规则且较多的亮点一般是因为玻片材质存在杂质或者是表面的灰尘,可以通过调整焦面到组织上来就可以避免。

Q:拍照过程中,通道切换的方法是怎样的?
A:先在白光下找到目标位置,并调到最清晰的焦距,再切换到荧光通道进行拍摄。

Q:如何避免染料褪色?
A:使用Abbkine经过条件优化的SuperKine™ 增强型抗荧光淬灭剂,完美避免荧光染料的淬灭和褪色。

Q:拍照过程中组织局部清晰,其它区域模糊是什么原因?
A:制作组织切片过程中,有局部区域在玻片上粘贴不牢固,有脱片倾向,导致样本不在一个焦面上,显微镜下呈现出模糊的影像。

Q:组织细胞无着色?
A:一种情况是实验操作问题,包括实验操作方法不准确、实验材料不新鲜、抗体种属和反应性选择和抗体质量问题等,这些均可通过设置阳性对照以及阴性对照实验来排除。
第二种情况是蛋白表达问题,IF实验准备阶段也需要查阅大量资料,初步确认目的蛋白的时空表达谱(包含表达量、表达部位、刺激条件等)。

 

 

细胞和蛋白研究工具(Cell and protein research tools)

Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

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