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干货 | 免疫沉淀实用工具把IP/Co-IP实验安排得明明白白!

发布时间:2021年11月04日 浏览次数:245

当我们需要少量地富集蛋白,并进行单一检测时,IP实验成为蛋白学研究伙伴们地不二之选。

当我们需要证明蛋白间相互作用时,Co-IP几乎是必做项目。利用细胞裂解样本,证明胞内蛋白的相互作用,阐明现象后的分子机制。

Co-IP实验简而言之,就是一场爱的追捕小游戏,抗体捕获蛋白(抗原),珠子捕获抗体-抗原复合物。现在,如果把珠子与抗体-抗原复合物“绑定”在一起,那么IP/Co-IP实验将会省去 “追爱”过程中许多繁杂的步骤。小编带你梳理传统IP/Co-IP实验与优化升级后的IP/Co-IP实验的步骤和注意点,让你在这场爱的追逐中立于不败之地。

传统IP和Co-IP基本步骤:

  • 1.添加合适的抗体。
  • 2.抗体与目标蛋白结合。
  • 3.添加Protein A/G使抗体-蛋白质复合物不溶。
  • 4.溶液离心分离抗体-蛋白质复合物。
  • 5.去除上清液并洗涤。

传统ProteinA/G在IP应用的局限性:

  • 1.耗时
  • 2.当抗体种属、亚型和ProteinA/G不匹配时,ProteinA/G和抗体结合能力弱
  • 3.和样本中的其他免疫球蛋白结合,产生非特异性结合,导致高背景

升级之后的IP和Co-IP基本步骤:

  • 1.添加合适的抗体偶联物。
  • 2.抗体与目标蛋白结合。
  • 3.溶液离心分离抗体-蛋白质复合物。
  • 4.去除上清液并洗涤。

用了我们升级之后的琼脂糖/磁珠偶联标签抗体之后,我们可以很惊奇地发现,实验过程省去了一个耗时而且复杂的抗体与载体结合的实验操作,而且抗体与Beads的完美结合,提高了目标蛋白被“拉”下来的精准性,得到的靶蛋白纯度和产量都会明显提高,而且操作简便,省时省力!

说到这里,大家对咱们Abbkine的升级产品肯定已经迫不及待了,小编现在非常自豪地把我们的琼脂糖/磁珠偶联标签抗体隆重地推荐给大家:

货号 名称 运用
A02010AGB Anti-DDDDK Tag Mouse Monoclonal Antibody, Agarose) IP/Co-IP
A02010MGB Anti-DDDDK Tag Mouse Monoclonal Antibody, Magnetic Beads) IP/Co-IP
A02040AGB Anti-HA Tag Mouse Monoclonal Antibody, Agarose IP/Co-IP
A02040MGB Anti-HA Tag Mouse Monoclonal Antibody, Magnetic Beads IP/Co-IP
A02050AGB Anti-His Tag Mouse Monoclonal Antibody, Agarose IP/Co-IP
A02050MGB Anti-His Tag Mouse Monoclonal Antibody, Magnetic Beads IP/Co-IP
A02060AGB Anti-Myc Tag Mouse Monoclonal Antibody, Agarose IP/Co-IP
A02060MGB Anti-Myc Tag Mouse Monoclonal Antibody, Magnetic Beads IP/Co-IP
A02170AGB Anti-V5 Tag Mouse Monoclonal Antibody, Agarose IP/Co-IP
A02170MGB Anti-V5 Tag Mouse Monoclonal Antibody, Magnetic Beads IP/Co-IP

同时,在IP-WB实验过程中,有一个一直困扰着咱们的难题,当靶蛋白分子量接近25KD或者50KD时,抗体重链或者会严重干扰咱们靶蛋白的观察。这个时候应该如何消除抗体重链或者轻链的干扰呢?下面为大家解析一下重链轻链的由来和应对方法:

  • 如果目的蛋白分子量接近于50kDa,为了避免抗体重链的杂带干扰,推荐使用轻链特异性的二抗;
  • 如果目的蛋白分子量接近于25 kDa,推荐使用重链特异性的二抗,从而避免IgG轻链的杂带干扰。
货号 名称 功能
A25012 IPKine™ HRP, Goat Anti-Mouse IgG LCS 避免重链干扰
A25022 PKine™ HRP, Mouse Anti-Rabbit IgG LCS 避免重链干扰
A25112 IPKine™ HRP,  Goat Anti-Mouse IgG HCS 避免轻链干扰
A25222 IPKine™ HRP, Goat Anti-Rabbit IgG HCS 避免轻链干扰
A25122 IPKine™ HRP, Mouse Anti-Rabbit IgG HCS 避免轻链干扰

注:二抗预先经过其它物种血清吸附,可有效避免抗体与样本的交叉反应。

比如二抗预先经过人血清吸附,相当于在抗体制作过程中,该二抗可能与人样本结合的位点已经被结合,如果此时客户的样本是人,那么该二抗就能有效避免和人样本再发生交叉反应。

值得一提的是,IPkine二抗特点优越,让使用者放心:

  • 更干净的背景,更清晰的条带,卓越的信噪比;
  • 完美避免抗体重链或者轻链的干扰问题;
  • 操作简便,无需额外的试剂和操作步骤;
  • 经特殊化处理,与其它种属的IgG分子交叉反应极低;
  • 小包装即用型试剂,极具性价比。

最后,为了满足广大粉丝的需求,在Abbkine研发专家的持续努力下,我们推出了两款通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱, 直击传统的IP/Co-IP实验痛点,让IP/Co-IP实验化繁为简、高效便捷,满足您不同的实验需求,助力您的蛋白学研究事业。

货号 名称 运用
KTD104-CN 通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(磁珠) IP/Co-IP
KTD105-CN 通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(琼脂糖) IP/Co-IP

该系列新品,亮点显著,细致入微的设计让人惊叹:

  • 便捷、通用:包含 IP 和 Co-IP 实验所需的必备试剂组分,优化的变性及非变性裂解液,可同时满足样本 IP/Co-IP 或 WB 需求;
  • 可靠、稳定:包含即用型 IP negative control,可排除 IgG 本身和目的蛋白或其它特定生物分子的非特异性结合,确保 IP 抗体的特异性;包含独特的IPKine™ 二抗,完美消除重链干扰;
  • 高效:高效的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,节省抗体用量。

如图所示,通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱组分设计巧妙,可见一斑:

 

细胞和蛋白研究工具(Cell and protein research tools)

Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

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