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Abbkine 带你了解IP工具箱!

发布时间:2021年10月14日 浏览次数:260

一、什么是IP(免疫沉淀)/Co-IP(免疫共沉淀)?

免疫沉淀是一种纯化蛋白质的方法,将目标蛋白的抗体与细胞提取物一起孵育,使抗体与溶液中的蛋白质结合,然后利用蛋白 A/G 偶联的琼脂糖微珠从溶液中分离出抗体/抗原复合物,从而将目标蛋白质从复杂样品中分离出来,最后通过SDS-PAGE即可分离出样品用于蛋白质印迹分析。Co-IP是免疫沉淀的延伸,主要用于蛋白—蛋白相互作用检测。

二、免疫共沉淀的优势

  1. 目标蛋白以其天然状态被下拉,从而减少了人为因素的影响;
  2. 可以拉到完整的蛋白质复合物,对于蛋白质及其功能途径的表征非常有用;
  3. 与多种样品制备和蛋白质鉴定方法高度兼容;
  4. 操作简单明了。

三、免疫沉淀(IP)常见问题及解决方案

免疫沉淀常见的问题主要是背景很高和无目的蛋白检出:

1.背景高

a.洗涤不够充分

解决方案:在加入洗涤剂洗涤的时候,应当盖上管盖反复颠倒数次,动作应当轻柔,但次数要有保证,接着再放到离心机里离心;

b.去垢剂不溶性蛋白残留

解决方案:加入上样缓冲液,煮5分钟左右,而后离心,吸取上清进行WB;

c.非特异性蛋白和珠子产生结合

解决方案:珠子应用BSA充分预封闭,确保BSA新鲜。具体方法为:新鲜琼脂糖珠在1%  BSA(PBS溶解)孵育1 h,使用前再用PBS洗涤3-4次;

d.抗体特异性不够

解决方案:使用可以做IP的抗体,阅读文献购买适合做IP的抗体,根据文献报道的加入抗体的量进行IP;

e.抗体过多引起非特异性结合

解决方案:一般目的蛋白直接的binding比较稳固时,减少抗体的使用量;

f.蛋白样品中蛋白浓度过高(尤其是在细胞系上转染过表达两种蛋白质)

解决方案:用裂解液适当的稀释蛋白样品,或者可以选择目的蛋白有表达的细胞系,不做转染,直接收蛋白做IP;

g.IP过程中抗原降解

解决方案:在裂解液中一定要加入适当的蛋白酶抑制剂,尤其是对于含多个基团(如糖基化)的蛋白,更应当注意在冰上操作和4 °C离心。

2.无目的蛋白检出

a.用的细胞或者组织样品中本身不表达或者低表达这个蛋白,可以换一种该蛋白高表达的细胞系或者组织,重新进行IP;

b.抗体量加的太少,导致不能结合到更多的抗原,应当增加抗体浓度;

c.目的蛋白没有从珠子上洗脱下来,此时,首先应确定洗脱缓冲液的质量是否良好,另外可以尝试其他的洗涤剂;

d.细胞或组织没有裂解完全,或者完全没有裂解。此时,应当检查裂解液是否已经失效,可以重新配置,再进行IP;

e.抗体没有结合到珠子上,此时,应当确保使用的珠子与抗体亚型是一致的。

四、推荐产品

通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(磁珠)/通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(琼脂糖)

基于传统的IP/Co-IP实验操作繁琐耗时、试剂用品种类繁多、实验结果稳定性可靠性差的痛点,Abbkine开发出通用型标准化的免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱,可满足大多数用户IP/Co-IP的需求,是IP/Co-IP检测实验的不二之选。

独特优势

a.高效:高效的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,节省抗体用量;

b.便捷、通用:综合 IP/Co-IP和WB实验所需的所有必要缓冲液,可同时满足样本IP/Co-IP或WB需求;

c.可靠、稳定:包含即用型IP negative control,可排除IgG本身和目的蛋白或其它特定生物分子的非特异性结合,确保IP抗体的特异性;包含独特的IPkine TM 二抗,完美消除重链干扰。

结果展示

Protein was extracted from the non-denaturing Lysis Buffer, then it was verified by Co-IP. While the whole cell lysates (Input) and Co-IP samples were validated with Stat1 monoclonal antibody, Stat2 polyclonal antibody, and GAPDH monoclonal antibody respectively by WB.

产品名称 货号
通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(磁珠) KTD104-CN
通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(琼脂糖) KTD105-CN

 

细胞和蛋白研究工具(Cell and protein research tools)

Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

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