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Abbkine HRP偶联二抗文献解读

发布时间:2021年09月09日 浏览次数:227

Abbikine产品:HRP-linked secondary antibody

英文名:STAT3 induces colorectal carcinoma progression through a novel mir-572-MOaP-1 pathway

中文名:STAT3通过一条新的miR -572-MOAP-1通路诱导结直肠癌进展

作者单位:第四军医大学唐都医院普外科

杂志名称:Onco Targets and Therapy

影响因子:3.337

背景:结直肠癌是最常见的死亡原因之一。最近的研究表明,STAT3和miR-572都参与了CRC的进展。STAT3在miRNA表达中起重要作用。此外,MOAP-1是一种诱导细胞死亡或凋亡的促凋亡蛋白,与miRNA直接相关。因此,本研究旨在探讨miR-572和STAT3是否参与共同通路,以及MOAP-1在此过程中的作用。

方法:采用qRT-PCR或Western blot检测STAT3、miR-572、MOAP-1在人CRC组织和多种细胞系中的表达。MTT、transwell迁移和侵袭试验分别用于评估细胞生长、迁移和侵袭。采用双荧光素酶报告基因检测miR-572与MOAP-1的相关性。

结果:在原发性CRC标本和细胞系中,STAT3水平升高伴随着miR-572水平升高和MOAP-1水平下降。STAT3通过上调miR-572的表达促进CRC细胞的生长、迁移和侵袭。随后,miR-572通过与其3'UTR的相互作用抑制MOAP-1蛋白的表达。

结论:本研究提出了一种参与CRC进展过程的STAT3-miR-572-MOAP-1通路,这可能是开发新的预防和治疗人类结直肠癌的潜在靶点。

实验结果解析:

 R1:在原发性CRC标本和细胞系中,STAT3水平升高伴随着mir-572水平升高和MOAP-1水平下降

A:采用qRT-PCR检测40例冷冻结直肠癌组织中STAT3和MOAP-1 mRNA水平的相关性,STAT3与MOAP-1的mRNA水平呈负相关关系。

B:在人的CRC细胞系中,分别用qRT-PCR和Western blot检测mir-572和MOAP-1的相对水平。在人类CRC细胞系中,miR-572与MOAP-1蛋白的表达呈负相关。

 

R2STAT3上调了CRC细胞系中的miR-572

A:在LS174T细胞中转染STAT3- CA后,miR-572的表达水平升高。

B:通过siRNA或者STAT3抑制剂处理细胞后可以显著降低miR-572的表达水平。

C:当用激活STAT3的配体EGF处理血清饥饿的LS174T细胞时,miR-572表达上调。

D:相比之下,通过siRNA或STAT3抑制剂WP1066抑制STAT3,可以显著降低SW480细胞中miR-572的表达水平。

 

R3miR-572促进CRC细胞的生长、迁移和侵袭,为了进一步确定miR-572是否刺激肿瘤细胞的致癌表型,对miR-572进行过表达或者降低功能的检测

A:miR-572的过表达可导致细胞活力显著增加。

B:与对照组相比,在细胞中转染miR-572抑制剂后,细胞的生长显著受到了抑制。

C:miR-572可以促进肿瘤细胞LS174T的迁移和侵袭能力。

D:与对照组相比,在细胞中转染miR-572抑制剂后,细胞的迁移和侵袭能力也受到抑制。

 

R4miR-572下调MOAP-1表达,miR-572MOAP-1 mRNA水平的反向关系提示miR-572可能降低MOAP-1的表达

A, B:用miR-572minic转染两种细胞,并通过WB检测MOAP-1的表达水平,结果显示MOAP-1在这两种细胞系的表达明显下降。

C, D:miR-572抑制剂增加了MOAP-1在HCT116和SW480细胞株中的表达水平。

 

R5miR-572通过靶向MOAP-13'UT使MOAP-1的表达下调

为了确定MOAP-1是否为miR-572的靶点,采用TargetScan预测软件测序寻找miR-572的结合位点。

A:miR-572 的种子序列表明与 MOAP-1 3'UTR 的靶位点完全互补。

B, C:通过在LS174T(图5B)和SW620细胞(图5C)中使用3'UTR荧光素酶报告基因检测,验证了与野生型克隆的荧光素酶活性,

这些结果表明,miR-572通过与MOAP-1的3'UTR序列结合抑制了MOAP-1的表达。

 

R6STAT3通过miR-572-MOAP-1途径诱导CRC进展

为了评估STAT3是否通过miR-572-MOAP-1途径诱导CRC细胞生长、迁移和侵袭,对STAT3在细胞生长中的作用进行了一个评估。

A, B:虽然STAT3敲低的SW480细胞的细胞生长显著降低,但转染miR-572模拟物或MOAP-1 siRNA后,这些细胞的增殖潜能恢复。

C, D:STAT3下调后SW480细胞的迁移和侵袭能力明显降低,然而,在转染miR-572模拟物或MOAP-1 siRNA后,这些抑制作用被恢复。

 

结论:在本研究中,作者提供了证据,证明了miR-572的激活是由STAT3诱导的。作者推测STAT3在miR-572启动子区域结合,因为它对miR-572的转录诱导非常重要。支持这一推测的是,通过EGF处理激活STAT3导致miR-572的上调。另一方面,通过siRNA或WP1066抑制STAT3可显著降低miR-572的表达水平,说明STAT3和miR-572是CRC细胞生长、迁移和侵袭所必需的。本研究进一步支持STAT3在人类CRC miRNAs调控中发挥关键作用。

 

创新点

本研究提出STAT3-miR-572-MOAP-1通路参与CRC进展过程。STAT3的激活上调了miR-572的表达,并通过与MOAP-1的3'UTR相互作用,依次降低MOAP-1的表达,从而对CRC细胞的生长、迁移和侵袭产生积极的影响。因此,该研究为开发新的人类结直肠癌治疗药物提供了一个潜在的新靶点。

 

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