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还在为ELISA实验焦头烂额,实验大神带你揭开ELISA面纱

发布时间:2021年03月11日 浏览次数:414

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay)的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。ELISA常见的标本一般包括:液体类标本(包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等);培养细胞;组织标本。一般ELISA实验类型有四种,竞争法、间接法、双抗体夹心法、双抗原夹心法。很多小伙伴在进行ELISA实验的时候,常常遇到些“飞来横祸”,然后不知所措,比如ELISA试验的标准曲线和测定的结果重复性差,实验所得ELISA板的最终结果为蓝色(是无奈的颜色,唉),等等等等,当然意外总是超出期待,尤其是实验中的意外,很难猜,那么我们今天就来走进ELISA实验的世界,看看有哪些杀手锏,可以助你一路通关。

一、什么是ELISA实验

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay)的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。Elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。

二、常见ELISA实验中的样本类型以及处理方法

ELISA常见的标本一般包括:液体类标本(包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等);培养细胞;组织标本。

那么是不是仅仅有了这些标本,就可以开始ELISA实验了呢?too naïve,这些标本在收集的时间、方法以及保存条件都有一定的要求,不能满足要求那么实验将会惨不忍睹,不要怪我没有提前提醒大家。来来来,下面划重点:

  1. 血清:全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原、无内毒素试管。
  2. 血浆:抗凝剂推荐使用EDTA-2Na,样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂样品。
  3. 组织匀浆:用预冷的匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
  4. 细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
  5. 其它生物样品:如固体生物代谢物,按组织样本处理方法操作,悬浮物应离心去除。

以上为样本的实验前处理方法,如果遇到急事不能立刻用这些新鲜的样本来进行实验的话,那么也无妨,接下来跟大家分享,样本处理后的储存方法,在短时间内是可以应急的,但是还是建议新鲜样本最佳:

样本保存时间 保存方法
1周内检测 保存于4℃
1个月内检测 按一次使用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融
6个月内检测 分装保存于-80℃,避免反复冻融

遵大神嘱,实验方可无恙,按此条件以及时间进行样本的保存处理,一定时间内再去用样本进行实验是可以的。

三、ELISA方法类型对比

材料处理完毕,那么就要真正的运用在实验类型上了,一般ELISA实验类型有四种,竞争法、间接法、双抗体夹心法、双抗原夹心法,这四种方法有哪些不同,以及各自的优缺点是什么?我们一起梳理。

类型 检测对象 适用范围 试剂盒特征
竞争法 测抗原 小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。 小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。
间接法 测抗体 间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。间接法成功的关键在于抗原的纯度。 对IgG,IgM,IgA,IgE等指标的测定常用此法。
双抗体夹心法 测抗原 适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。 检各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等
双抗原夹心法 测抗体 用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法。 名称带有Antibody等字样的试剂盒

 

说了这么多干货,相信大家也是收获满满,那么有没有最后可以推荐给大家的相关试剂盒呢?答案是肯定的,Abbkine的ELIKINE试剂盒拥有几大优势:

1、高效、灵敏、特异的抗体;

2、定量准确稳定的重复性和可靠性;

3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;

4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;

5、节省实验经费。

一盒在手,实验无忧,Abbkine,您的实验好帮手,专注省心,专家创新!

货号 名称 规格 价格
KET7005 EliKine™小鼠白介素-1β ELISA定量试剂盒 48T 详情请咨询
KET6013 EliKine™人白介素-1β ELISA定量试剂盒 48T 详情请咨询
KET6017 EliKine™人白介素-6 ELISA定量试剂盒 48T 详情请咨询

 

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