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干货|蛋白偶联知识小课堂开课啦!

发布时间:2021年05月31日 浏览次数:357

偶联技术的应用背景

1.怎么定义偶联?

将酶、生物素、荧光素、琼脂糖、磁珠等一些易于检测或易于分离的物质,用一定的技术共价标记或缀合到抗体、蛋白质或其它小分子物质上。

2.为什么会有偶联技术的产生?

抗体、蛋白质或其它小分子的偶联是许多类型的生物学实验的必要步骤。

比如:为了在免疫测定(比如WB/IHC/IF等免疫学实验)中进行特异性蛋白的检测,我们将一抗或者二抗上偶联上酶、荧光素等;在细胞染色(生物成像)应用中,将活性染料(荧光素)直接与细胞外或细胞内的蛋白(多肽)结合,以产生可见且可测量的染色;

将蛋白质或抗体上偶联琼脂糖或磁珠,提供了靶向纯化的方法。比如,Abbkine用于IP实验的琼脂糖(磁珠)偶联的抗体,直接省去了ProteinA/G的使用。

为了简化偶联的过程,商业化试剂盒和服务应运而生!

LinKine™偶联系列产品线

LinKine™偶联系列产品线

AbFlour系列是Alexa Flour, Dylight系列的完美替代

1.LinKine™偶联系列产品线的内涵和外延有哪些?

LinKine™ 偶联标记试剂盒提供快速标记抗体、蛋白质、多肽等生物分子所需的全套试剂,仅需3个简单的步骤,即可获得高品质的偶联产物。

可直接标记 HRP,Biotin,FITC,Cy3,AbFluor ™荧光染料以满足科研应用,药物研发以及诊断试剂盒开发的需求。

操作简便,稳定高效,偶联标记后的抗体,可兼容各类免疫学应用,比如ELISA 、 流式细胞术、免疫印迹、免疫组化以及免疫荧光等。

LinKine™偶联系列产品线内涵和外延

欢迎进入视频中心查看Linkine偶联试剂盒操作步骤:https://www.abbkine.cn/technology-center/video-center

2.可标记哪些生物分子?

抗体、蛋白质、多肽、生物分子等(含游离氨基),结构上的伯氨基—NH2。

3.偶联物有哪些类型?

  • 酶/生物素
产品名称 货号
LinKine™ HRP Labeling Kit KTL0100
LinKine™ AP Labeling Kit KTL0110
LinKine™ Biotin Labeling Kit KTL0120
LinKine™ Biotin-XX Labeling Kit KTL0125
  • 传统荧光染料
产品名称 货号
LinKine™ FITC Labeling Kit KTL0210
LinKine™ Cy3 Labeling Kit KTL0220
  • AbFlour新一代荧光染料
产品名称 货号
LinKine™ AbFluor™ 350 Labeling Kit KTL0500
LinKine™ AbFluor™  405 Labeling Kit KTL0510
LinKine™ AbFluor™ 488 Labeling Kit KTL0520
LinKine™ AbFluor™ 555 Labeling Kit KTL0530
LinKine™ AbFluor™  594 Labeling Kit KTL0540
LinKine™ AbFluor™ 647 Labeling Kit KTL0550
LinKine™ AbFluor™  680 Labeling Kit KTL0560
LinKine™ AbFluor™  750 Labeling Kit KTL0570

AbFlour新一代荧光染料

LinKine™偶联系列产品线性能

提供形式:试剂盒

主要组分:标记缓冲液(labeling solution);激活的酶/染料 (activated solution);终止粉/纯化柱

规格:3*20 μg/100 μg/3*100 μg/1 mg

储存方式:试剂盒,HRP和生物素4度储存6个月,荧光染料偶联试剂盒-20度保存6个月。

偶联产物,短时间使用,4度保存至少一个月;长期储存,分装存于-20度,或加等体积甘油,荧光偶联物注意避光。

常见问题解答FAQ

Q1. 客户如何选择规格?

我们的规格是以最适可标记的抗体量来的,因为不同摩尔比的都可以做偶联,只是偶联效率不同。

如100 µg, labeling from 75 µg to 300 µg and optimized for 100 µg of antibody

 

Q2. 客户标记蛋白,可以按照我们的实验体系步骤做吗?

我们试剂盒默认是以抗体来摸索最适比例和实验体系步骤的,客户如果标记蛋白需要根据蛋白的分子量进行相应调整,当然,按照我们的体系来做也是一定可以标记,只是可能不是在最适条件下。

 

Q3. 试剂盒可以做多少次?

HRP的需要终止液,1X规格提供1管,3X规格3管,因为终止粉末溶解后须在48小时内使用,所以上1X可以做1次,3X可以做3次;其他盒子需要纯化柱, 1X规格提供2个,3X规格3个,所以上1X可以做2次,3X可以做3次。

 

Q4. 抗体溶液组分的要求?抗体浓度要求?

一般推荐PBS,不能含甘氨酸等含有氨基的组分,甘油浓度不能太高,具体详见说明书试剂准备部分。

抗体浓度一般要求大于2mg/ml,因为体系的终浓度为2mg/ml,浓度太低建议浓缩,以便达到适宜的偶联效率。

 

Q5. 关于偶联效率问题?

每个染料不一样,一般一个抗体上偶联3-6个荧光染料是合适的,不同的抗体由于结构不一样,可能有些差异。

①抗体浓度计算:C(mg/mL) = {[A280 -(Amax×Cf)]/1.4} × 稀释因子。

  • C 是指实验收集的偶联物浓度;
  • 稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数;
  • A280 和 Amax 分别是指在 280 nm 处的吸光度以及在最大吸收波长处的吸光度;
  • Cf 是校正因子,不同染料不同;
  •  1.4 则是指 IgG(mL/mg)的消光系数。

②DOL计算: DOL = (Amax× Mwt × 稀释因子)/(ε × C)

  •  Amax 指在最大吸收波长处的吸光度;
  • 稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数;
  • C 是指实验收集的偶联物浓度;
  •  Mwt 是指待标记样本的分子量;
  • ε 是染料的消光系数;
  • 生物素标记试剂盒,可以用HABA-亲和素方法进行检测;
  • HRP标记试剂盒,标记率=OD403/OD280。

 

为了广大“因粉”的厚爱,我们还会有很大科研惊喜等着大家哟。我们还有大量的细胞因子新指标将会陆续与大家见面。同时,Abbkine的技术专家为了给广大读者提供学习生物知识的平台,经过不懈努力,将多种高端生物实验的干货整理出来,后期陆续在微信公众号中刊登,请广大热爱科学的读者持续关注Abbkine公众号。

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Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

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