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蛋白提取实验遇bug, don't worry瞅瞅这儿

发布时间:2021年02月25日 浏览次数:756

说到蛋白提取技术,可能大家并不陌生,它贯穿于蛋白检测实验的方方面面,是决定实验成败的基础因素。分离纯化蛋白质,首先要从原材料中提取目的蛋白,然后通过粗分离的方法除去大量杂质,最后进行精细分离,得到目的蛋白。

为了让大家更便捷有效地提取蛋白,今天要谈到的蛋白提取实验过程中,大家在2020-2021年期间遇到的常见问题,我们进行了汇总,比如:总蛋白提取试剂盒是否适用于下游的Co-IP实验?蛋白提取试剂盒是否适用于冰冻后组织蛋白质的提取?该试剂盒每次提取需要样本量是多少呢?蛋白提取过程中是否要加入蛋白酶抑制剂……特别是对初次接触蛋白学实验,跨专业学习,没有实验室师兄师姐带,跟着网上视频学习做实验的小伙伴来说遇到的问题会更多,甚至做了几个月蛋白研究也是毫无起色,令人唏嘘。实验枯燥,又没有成就感……

如果这个时候有专业的老师指点,蛋白提取实验会事半功倍。因此,为了让广大“因粉”更深入了解产品使用功能,以及在实验过程中规避实验误区,我们进行了实验过程中可能遇到的问题汇总,大家快来康康。

一、问:Abbkine蛋白提取试剂盒是否可以用于下游的Co-IP实验?

可以用,Exkine™系列试剂盒的作用的提取具有生物活性的细胞蛋白,可以保持蛋白的天然空间结构和生物活性,可以用于下游的Co-IP实验。所得的蛋白可以应用于WB, Dot blot, IP,Co-IP等下游实验。

二、问:Abbkine蛋白提取试剂盒是否可以用于提取冰冻后的组织样本?

可以用,该系列试剂盒做过冰冻组织样本蛋白提取的验证,对于新鲜和冰冻的组织,可以进行蛋白质提取,这是Exkine™系列试剂盒相对于其它众多品牌,具有压倒性的优势。

三、问:该系列试剂盒每次提取需要的样本量是多少呢?

对于该系列试剂盒,细胞样本蛋白提取,需要获取1-3×107个细胞;对于组织样本的提取,需要获取50-100 mg的组织小块。

四、问:蛋白提取过程中是否要加入蛋白酶抑制剂?

为了防止蛋白提取过程中降解,建议使用混合蛋白酶抑制剂比较合适,推荐Abbkine的BMP1001蛋白酶抑制剂(100X),该抑制剂是一种通用型的蛋白酶抑制剂,能同时抑制多种蛋白的活性。

五、问:该系列试剂盒的50T和200T分别可以做多少次?

按照标准的用量,分别可做50次和200次。

六、问:该试剂盒对于较硬的组织样本,包括牙齿、骨骼研磨的方法是什么呢?

KTP3006Exkine™总蛋白试剂盒提取小鼠和大鼠骨组织为例,样本前处理方法如下:

使用器材及试剂:RIPA、PMSF、液氮、研钵、骨锤

操作:

  1. 取小鼠胫骨骨组织剔除肌肉和多余组织后称量100 mg,剪碎后放在研钵中,倒入5ml的液氮进行研磨(注意:研磨的速度和力度,减少骨组织向外溅出),重复加入液氮2-3次,充分研磨成粉状后,转移到离心管中,加入裂解液及蛋白酶抑制剂冰上裂解30 min后,10000 g离心10 min取上清。
  2. 大鼠骨组织处理多余组织后,称取100mg,剪碎使用骨锤处理后倒入适量液氮进行研磨,重复1-2次,充分研磨即可得到干粉状,加入RIPA和PMSF后冰上放置30min后离心取上清即可。

提示:骨锤与研磨结合,比单纯剪碎研磨的更充分,且更易操作,还能提取到更多的蛋白。

小伙伴们是否在初期都会遇到这些问题,同时欢迎实验中遇到的其他问题的可以网站用户评论区留言告诉我们哦。也可以在通过以下方式与我们联系,我们的邮箱地址是: support@abbkine.com,联系电话为027-59716789。

为了广大“因粉”的厚爱,我们还会整理出更多的实验方法FAQ给大家学习和参考。同时,Abbkine的技术专家为了给广大读者提供学习生物知识的平台,经过不懈努力,将多种高端生物实验的干货整理出来,后期陆续在微信公众号中刊登,请广大热爱科学的读者持续关注Abbkine公众号。

Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

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