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如何全面认识蛋白纯化,Abbkine给你答案

发布时间:2021年07月15日 浏览次数:463

蛋白质,对于生物科学爱好者来说,也行并不陌生,它是生命活动的主要承担者。蛋白质作为生物体的重要组成成分,分布广泛,所有的器官、组织及细胞的各个部分都含有蛋白质,蛋白质是细胞中含量最高的有机化合物,占人体干重的50%,某些组织中含量更高;蛋白质具有重要的生物学功能,比如作为生物催化剂、调节代谢、起免疫保护作用、转运和存储物质、发挥运动与支持作用,参与细胞间的信息传递。

对于蛋白的研究可以说是涉及了生物学领域的方方面面,包括:蛋白提取、蛋白纯化、蛋白偶联、蛋白定量及蛋白检测等等。而蛋白纯化作为蛋白研究中比较重要的一块,是一项重要的操作技术,通常采用多种方法的组合来实现蛋白的完全纯化,下面为您主要介绍亲和层析这种蛋白纯化的方法。

亲和层析是一种吸附层析,依赖于蛋白质和它的配体(ligand)之间的相互作用来分离的。配体通常指的是能与另一个分子或原子结合(一般是非共价结合)的分子、基团、离子或原子。但在亲和层析中,配体是通过共价键先与基质结合,配体可以是酶结合的一个反应物或产物,或是一种可以识别靶蛋白的抗体。具有很高的特异性,所以有时只用亲和层析就可使蛋白质的纯化提高1000至10000倍

1.组氨酸标签 6X His-Tag

固定化金属离子亲合层析(IMAC)是纯化组氨酸标签融合蛋白最常用的方法。选择性地负载共价金属离子(比如镍或钴)的IMAC层析介质能够截留组氨酸标签蛋白,并在变性条件下,能从包涵体中纯化出不溶性的组氨酸标签蛋白。Ni是最常用的螯合金属离子,与之配套的Resin配体主要为亚氨基二乙酸(IDA)和氮川三乙酸(NTA)。

2.GST标签纯化

谷胱甘肽s-转移酶(GST) 基因融合系统是用于从大肠杆菌中生产的GST-标签蛋白(26KD)的表达、纯化和检测的通用系统。可在非常温和的条件下对GST-标签蛋白进行纯化,从而保留目的蛋白的功能和抗原性。GST标签可增加目的蛋白的溶解性和稳定性。GST标签很大,其相对分子量(Mr)为26000。一段特殊的切割序列允许在纯化后用不同的蛋白酶简单地去除GST标签。

3.MBP Tag 纯化

麦芽糖结合蛋白(MBP)是一种有用的亲和标签,它们能增加生成目的蛋白的表达水平和溶解性,缓解重组蛋白的细胞毒性、增加表达水平。MBP标签也促进依附蛋白合适的折叠。因为MBP能增加溶解性,这(包涵体)聚集的重组蛋白特别有用。

4.Flag Tag 纯化

Flag标签(DDDDK标签)是一种重组DNA技术创造出来的蛋白质多肽标签,其氨基酸序列为DYKDDDDK,允许重组蛋白在非变性条件下进行温和洗脱。Flag标签目前已被广泛用于活细胞中蛋白质的功能研究和蛋白质的亲和纯化

5.Biotin Tag 纯化

生物素-链霉亲和素(streptavidin)是最常见的生物学结合系统,常被用于结合、分离/纯化生物素化的抗体、蛋白质、多肽、核酸以及其它分子或者相互作用复合体。【Strep-tag II】是一个只有8个氨基酸的小标签(WSHPQFEK),它的相对分子量只有1000,在绝大多数情况下它不会干扰结构和功能研究。Strep-Tactin与Strep-tag II 的亲和能力是streptavidin的近100倍!

 

工欲善其事必先利其器,也许您此时还在为选择优良的蛋白纯化工具而发愁,现在我们可以给大家推荐一系列蛋白纯化的产品解决方案,解决大家的燃眉之急!

产品名称 产品说明 货号 规格
PurKine™ His-Tag Ni-NTA Resin His标签纯化填料 BMR20010 5/10/50/100ml
PurKine™ His-Tag Protein Purification Kit (Ni-NTA) His标签纯化试剂盒 KTP20010 1mlx5/3mlx5
PurKine™ GST-Tag Glutathione Resin GST标签纯化填料 BMR20100 5/10/50/100ml
PurKine™ GST-Tag Protein Purification Kit (Glutathione) GST标签纯化试剂盒 KTP20100 1mlx5/3mlx5
PurKine™ MBP-Tag Dextrin Resin 6FF MBP标签纯化填料 BMR20206 5/10/50/100ml
PurKine™ MBP-Tag Protein Purification Kit (Dextrin) MBP标签纯化试剂盒 KTP20206 1mlx5/3mlx5
PurKine™ Biotin-Tag Streptavidin Resin 6FF 生物素标签纯化填料 BMR20306 2/10/50/100ml
PurKine™ Biotin-Tag Protein Purification Kit (Streptavidin) 生物素标签纯化试剂盒 KTP20306 1mlx5/3mlx5

 

本期主要讲的是蛋白纯化的亲和层析的纯化方法。小编又得跟大家说再见了。下期还有实验和产品应用操作小技巧与大家见面。敬请期待哦~~

 

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