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蛋白纯化标签怎么选?Abbkine告诉你!

发布时间:2021年08月26日 浏览次数:312

在重组蛋白中,通常需要利用蛋白标签来达到纯化蛋白的目的。常用的标签有6×His标签、MBP标签、GST标签、SUMO标签等。这些标签各具特色,在选择标签时,需要先了解目的蛋白和标签的特点。

6×His标签

6×His标签是应用最广泛的标签之一,它由六个组氨酸残基组成的融合标签,可插入在目的蛋白的C末端或N末端。组氨酸残基侧链与很多金属有强烈的吸引力,可形成固定化金属螯合层析(IMAC),对重组蛋白进行分离纯化,其中固态的镍是常用的配体。免疫原性较低,可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体,但由于其配体为金属,所以不能纯化金属敏感蛋白。

特点

  • 促溶性:几乎不能促进目的蛋白的溶解
  • 标签大小:0.84 kDa,标签较小,不影响目标蛋白的功能,无特殊需求则无需去除标签
  • 稳定性&亲和力:比较稳定,亲和力强,耐变性剂、洗脱剂等
  • 表达系统:和多种表达系统,如大肠杆菌,酵母等

MBP标签

由大肠杆菌K12的malE基因编码,如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端,可用位点特异性蛋白酶切除,如TEV酶等。

特点

  • 促溶性:促进蛋白的溶解,能屏蔽毒性蛋白
  • 标签大小:44.4 kDa,标签较大,一般需要去除
  • 稳定性&亲和力:稳定性一般,不耐变性剂、洗脱剂,温和洗脱
  • 表达系统:偏好在细菌中表达

GST标签

GST(谷胱甘肽巯基转移酶)标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶,能特异的与其底物谷胱甘肽结合,融合有GST标签的目的蛋白可以与带谷胱甘肽配基的亲和介质特异结合,再用酶将GST标签切除,即可得到单纯的目的蛋白。

特点

  • 促溶性:促进蛋白的溶解
  • 标签大小:26 kDa,标签较大,一般需要去除
  • 稳定性&亲和力:亲和力较差
  • 表达系统:偏好大肠杆菌中表达

SUMO标签

SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白,具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠的功能,可用于完整地切除标签蛋白,得到天然蛋白。

特点

  • 促溶性:促进蛋白的溶解
  • 标签大小:11.2 kDa,标签较大,一般需要去除
  • 稳定性&亲和力:亲和力较差
  • 表达系统:偏好真核表达,如酵母

Strep-II标签

Strep-tag技术开发的原理是众所周知的生物素(biotin)和抗生物素蛋白链菌素(streptavidin)之间的结合反应,Strep-tag II由8个氨基酸残基组成,标签较小,对蛋白影响较小。适用于金属蛋白,膜蛋白,具有多个亚单位的敏感蛋白质复合体。

特点

  • 促溶性:不能促进蛋白的溶解
  • 标签大小:1.06 kDa,标签较小,一般不需要去除
  • 稳定性&亲和力:亲和力较差
  • 表达系统:偏好真核表达,如酵母

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