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看过来|开学备货季,生化试剂盒已为您配齐了

发布时间:2022年09月22日 浏览次数:67

生化试剂盒显然是用来做生化检测的,但是什么是生化检测呢?生化检测(Biochemical detection)顾名思义是指用生物或化学的方法来对样本进行检测。测定指标通常为酶类、糖类、脂类、蛋白和非蛋白氮类、无机元素类等生物化学指标或者机体功能指标。常见的生化检测可简单分为两类:酶活检测,底物或产物检测。如按照指标的具体作用又可分为:氧化与抗氧系列、谷胱甘肽系列、氨基酸代谢系列、脂质代谢系列、氮代谢系列、辅酶I系列、辅酶II系列、神经递质系列、维生素系列、糖代谢系列、离子系列、酯酶系列等。实际操作过程中,客户常常遇到以下难点:

1.生化试剂盒不同检测方法有什么区别;

2.生化试剂盒与ELISA试剂盒的区别;

3.生化检测匹配的仪器有哪些;

4.生化样本前处理的方式如何选择。

通常,生化试剂盒的检测方法分为以下三类:

1.比色法(colorimetry)是生化检测中很常用的方法,以生成有色化合物的显色反应为基础,通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量。

2.分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性或定量分析。

3.荧光法:荧光在生化和医药领域有着广泛的应用。人们可以通过化学反应把具有荧光性的化学基团结合到生物特定结构上,然后通过观察示踪基团发出的荧光来灵敏地探测这些生物大分子。

ROS荧光法检测结果图示,图片来自网络

生化实验与ELISA实验的差异主要有如下表现:

名称 生化检测试剂盒 ELISA检测试剂盒
原理 化学反应 抗原-抗体特异性
检测目标 酶、糖类、离子、蛋白、有机小分子 蛋白、有机小分子
检测仪器 酶标仪、紫外-可见分光光度计、全自动化生化分析仪 酶标仪
检测方法 比色法、荧光法 比色法
结果表现形式 浓度、酶活 浓度
相对优势 检测范围宽、操作简便、样本种类广 灵敏度高、特异性高

那么如何选择正确的检测仪器呢?

检测仪器 优点 缺点
分光光度计 灵敏度高、波长范围广(通常为全波段) 样本使用量大、操作不方便
酶标仪 仪器操作简单、样本用量少 灵敏度低、可供选择的波长少
荧光酶标仪 样本用量更少、灵敏度高、操作简单、特异性好、结果准确 -

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生化样本前处理的方法千差万别,很大生化实验的小伙伴为此感到迷茫,这里我们可以对该问题进行一一解析。

  • 液体样本

血清:取新鲜血液,在25℃条件下静置30 min使血液凝结。4℃,2000×g离心15 min,取上层淡黄色澄清液体即为血清。血清置于冰上待测,若不能当天检测,于-80℃保存,可储存一个月;

血浆:取新鲜血液加入含有抗凝剂的试管中,颠倒混匀,4℃,700-1000×g离心10 min,取上层淡黄色透明液体即为血浆,不能吸取中间白色干扰层(白细胞和血小板)。将血浆置于冰上待测,若不能当天检测,于-80℃保存,可储存一个月;

尿液: 收集新鲜尿液,4℃,10000×g离心15 min,取上清于冰上待测。若不能当天测,放入-80℃保存,可储存一个月。

 

  • 需匀浆的样本

细胞:悬浮细胞离心收集细胞后用匀浆介质进行匀浆破碎;贴壁细胞用细胞刮刮下细胞(不能用胰酶和EDTA处理),再用匀浆介质匀浆破碎;

组织:去除血液,滤纸吸干,称重,放入匀浆容器中,按照重量(g):体积(mL)=1:9的比例加入2-8℃的匀浆介质,进行匀浆,4℃,10000×g离心10 min,取上清置于冰上待测,若不能当天检测,于-80℃保存,可保存一个月;

微生物:用PBS(0.01 M,pH 7.4)将菌沉淀洗2-3遍,先匀浆或研磨(有匀浆器就匀浆,没有就研磨)最后超声(真菌有细胞壁)。

 

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