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工具|如何运用image J对细胞荧光强度进行分析

发布时间:2021年05月17日 浏览次数:961

在对细胞进行免疫荧光实验后,拍照图片效果呈现得完美,但苦于手头上没有适合的分析软件、或相关分析计算机出现故障,只能出示图片,凭肉眼观察,这个荧光信号强度强,那个荧光信号强度弱。没有具体的数据对荧光信号强度进行分析,我对细胞进行的这些处理,到底对细胞的影响有多大?实验完美但缺乏说服力。

Image J软件完全免费,下载方便。作为一名科研人,每天面对各种让人抓狂的实验数据,如果能熟练运用Image J,对我们的实验结果分析无疑时非常有帮助的。

今天,就介绍如何通过Image J对细胞荧光强度进行分析。

以下面两张照片为例(两张照片拍照条件一样)↓↓↓

或许我们第一眼就能够看出来第二张图比第一张图荧光信号强度强,但是具体强多少呢?

第一步:导入图片

打开Image J,File→Open→打开要测量的图片。

第二步:转换图片格式

Image→Type→16-bit(此步骤是将照片转换成为灰度图片,举例为16-bit,但实际可根据需要选择8-bit或32-bit)。

第三步:设置测量参数

1.Analyze→Set Measurements;

2.在弹出的测量参数设置选项框中,勾选需要的测量参数:Area(所框选区域面积);Mean(框选区域平均灰度值);IntDen(Integrated Density)(框选区域荧光总强度),点击OK确认;IntDen=Area×Mean。

第四步:调出ROI Manager界面

1.Analyze→Tools→ROI Manger;

2.得到并框选Show All及Labels。

第五步:在图片上选择测量对象(带荧光的细胞以及背景)并计算

1.点击主界面的套索工具;

2.选择第二步中转换格式的图片,用套索工具在图上勾画出一个荧光细胞轮廓后,在ROI Manager界面点击Add,在下ROI Manager左侧栏处会出现一个对象,点中后选择Rename,可以对该对象重命名,此处就先将其命名为a,点击确定OK;

3.按照步骤2继续用套索工具在照片上勾选出多个测量对象,并按照顺序以及目的重命名,这里就框选了4个细胞a、b、c、d,及两个背景对象A、B(在具体实验中框选细胞自然是多多益善);

4.选中ROI Manager左侧栏第一个对象或最后一个对象,按住Shift,点击相对应的最后一个对象或第一个对象,即可对所有对象进行框选(如选中B后,Shift点击a);

5.ROI Manager界面点击Measure,弹出如下所框选对象的数据。

第六步:整理数据

1.Edit→Copy,可以将数据拷贝到Excel表中;

2.最后一列数据RawIntDen可以删去不需要(有些Image J软件不会出现该项数据),整理计算数据:修正IntDen-Area×Mean(背景)。

第七步:按同样的操作步骤对另一张图进行分析

最后,分析结果如下:

这样细胞荧光信号强度是不是一目了然了呢。

 

以上讲述了细胞免疫荧光强度的分析方法,现在就不得不说一下用于免疫荧光的抗体了。市面上的荧光二抗种类多且复杂,对小伙伴们来说,选到最合适的才是最重要的。Abbkine生产的高质量、高性价比Dylight系列荧光二抗,是实验室的不二之选。

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