干货|Western blot 常见问题分析
Western Blot(简称WB),蛋白质免疫印迹法,是基于蛋白质SDS-PAGE电泳分离和特异性抗体识别蛋白的特性,通过显色技术,以达到检测目的蛋白的技术。该技术广泛应用于定性检测蛋白水平的表达,活性分析与鉴定。该实验步骤多,关键点多,…
细胞污染怎么办,急救秘籍请查看
我们在进行细胞实验时,或多或少都经历过细胞污染的情况,一旦出现细胞污染的情况,全部细胞扔掉难免觉得可惜,之前花的时间、精力也全部打了水漂。硬着头皮接着往下做,做出的结果也缺乏说服力,还可能使污染情况更加严重。细胞污染情况复杂,通常认为的细胞…
Abbkine胚胎免疫荧光(IF)实验标准操作规程
一.细胞的固定 一般用PBS洗2遍,然后再做固定。当然,根据研究目的,PBS洗也不是一定要做的,比如做凋亡的TUNEL染色时就避免洗,因为凋亡的细胞在洗的过程中有可能会脱落。 另外在保存细胞爬片的时候,一般用培养皿或板,先在皿底放一层面巾纸…
Abbkine免疫沉淀(IP)实验标准操作规程
定义: 免疫沉淀是一种纯化蛋白质的方法。将我们感兴趣的一种蛋白质的抗体与细胞提取液孵育,以使抗体和蛋白质在溶液中结合。然后用蛋白A/G耦合的琼脂糖凝胶,从样品中将抗体/抗原复合物提取出来。这种物理方法可将所需蛋白质从样品中分离出来。然后样品…
Abbkine冰冻切片免疫组化(IHC-Fr)实验标准操作规程
1.冰冻切片固定:冰冻切片室温晾干,置于冷丙酮固定10 min,于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5 min。 2.抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中低火1…
Abbkine冰冻切片免疫荧光(IF)实验标准操作规程
冰冻切片固定:冰冻切片室温晾干,置于冷丙酮固定10 min,于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5 min。 抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中低火10-15…
ELISA的概念、原理、操作步骤
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和…
Abbkine 免疫印迹(WB)实验标准操作规程
一、实验方法原理 Western免疫印迹,是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 与Southern或Northern杂交方法类似,但W…