Elikine™ ELISA Kit

• 问：ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？
  答：

  1.样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致；

  2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快；

  3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁；

  4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用；

  5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致；

  6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

• 问：试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？
  答：

  稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×10⁶个cells，组织样本1 g左右。

• 问：如果Elikine系列部分产品Assay Buffer和Sample Buffer出现沉淀，是什么原因？应该如何处理？
  答：

  针对Elikine系列部分产品Assay Buffer和Sample Buffer出现沉淀的说明如下：

  1） Elikine系列部分产品Assay Buffer和Sample Buffer中含有动物血清（目的是减少非特异性结合），个别批次可能会出现沉淀，沉淀属于正常现象，不影响产品性能；您可以建议客户尝试37℃加热溶解沉淀0.5h-1h；若不能完全溶解，可以使用过滤的方式去除沉淀后继续使用；

  2） 如果您担心沉淀会影响产品性能，建议先做标准曲线验证，如果标准曲线R值大于0.99，说明该试剂盒正常，可以放心使用。

• 问：该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？
  答：

  可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

• 问：开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？
  答：

  开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

• 问：ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？
  答：

  无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

• 问：为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？
  答：

  因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

• 问：该类试剂盒的指标如何查找？
  答：

  建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

• 问：该ELISA试剂盒是否适用于culture cells？
  答：

  适用，在说明书的样本处理栏可以参考culture cells的样本前处理方法。

• 问：如果实验所得ELISA板的最终结果为蓝色，可能是什么原因？
  答：

  1.未加实验终止液；2.终止液失效。

• 问：普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？
  答：

  双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。

• 问：样本前处理：血加在抗凝管后，离心出来的是血清还是血浆？
  答：

  血浆。

• 问：该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？
  答：

  为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。

• 问：该类试剂盒是否与DS2 ELISA自动检测机器兼容？
  答：

  可以兼容。

• 问：如何用ELISA Kit辨别阳性阴性？
  答：

  关于临界值的问题，请参见以下内容：
  取一定量（通常少量即可）的阴性血清样品，使用一些孔进行测试，临界值是阴性血清样品的平均值乘以2或3。

Exkine™蛋白提取系列

Linkine™蛋白偶联试剂盒

• 问：如果想重复使用偶联试剂盒里配备的超滤管超滤管，该怎么操作？
  答：

  1. 用吸头吸取一定量的0.1 mol的NaOH清洗滤膜1-2次，目的是洗去滤膜上残留的物质；

  2. 用双蒸水冲洗滤膜2-3次，目的是洗去NaOH；

  3. 将超滤管浸泡在20%乙醇里，直至下次使用，目的是抑菌，防止滤膜干燥，滤膜干燥后会造成滤膜性能丧失。

• 问：偶联试剂盒里配备的超滤管是否可以重复使用？
  答：

  不建议重复使用的，重复使用可能会导致超滤管的性能降低。

• 问：待偶联物是IL-10，分子量是18.6 kD，估计是要偶联1 mg的蛋白，应该选择哪个规格型号?
  答：

  推荐1 mg的规格，选用超滤管3K的超滤管的型号。

• 问：该试剂盒是多物种通用型吗？
  答：

  是通用型的。

• 问：多少样本可以偶联上标记物？
  答：

  如按照说明书的操作进行实验，可保证超过90%的偶联效率。

• 问：怎么判断蛋白上是否有游离的氨基？
  答：

  如果是普通蛋白分子的话，查询蛋白的氨基酸一级结构就可以知道是否有游离氨基。

• 问：怎么判断样本偶联成功？
  答：

  做吸光度检测和免疫实验检测。

Purkine™蛋白纯化工具

• 问：蛋白纯化后的蛋白用于动物体口服应如何调节浓度？
  答：

  可用生理盐水置换靶蛋白中的洗脱液，用蛋白浓度测定仪检测浓度，再加生理盐水调节蛋白浓度。

• 问：纯化之后的样本中如果存在少量低分子量杂带，是什么原因？应如何解决？
  答：

  如果低分子量条带在原液中不存在，说明是在纯化过程中，靶蛋白出现降解，建议在低温下进行。去除保护液和洗杂的流速可以快一些，但是上样和洗脱的速度尽量不加快。

• 问：纯化试剂盒纯化之后出现低分子量杂带在Input样本中不存在，可能是什么原因？应如何避免？
  答：

  小分子杂蛋白是在纯化过程中的靶蛋白降解产物，建议客户纯化过程低温下进行，同时样本采用新鲜样本，同时纯化过程尽量在4度进行，去除保护液和洗杂的流速可适当加快。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

• 问：预装柱填料中是否含内毒素？
  答：

  本公司的纯化填料中含有微量内毒素，如果客户样品对内毒素有要求，建议用曲拉通将内毒素萃取出来。

一抗

• 问：抗体按1：200-1：500稀释，免疫组化的30ul抗体可以做几张片子？
  答：

  180-300张片子。如对具体计算方法有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

• 问：做WB时，如果靶蛋白跑条带有连接现象。这种现象可能的原因是什么？
  答：

  1. 样品离子浓度高；2. 上样量过大；3. 上样与跑电泳之间的间隔太长；4. 电泳时电压太高，发热导致扩散。

• 问：抗体做IHC，如果呈现假阴性结果，可能的原因是什么？
  答：

  1. 抗体浓度偏低，质量不佳以及抗体来源选择错误；
  2. 抗原修复不全，换修复液或加强修复；
  3. 组织切片本身这种抗原含量低，设阳性对照片；
  4. 血清封闭时间过长；DAB 孵育时间过短；
  5. 细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。如果想知道具体原因，请联系support@abbkine.com进行详细探讨。

• 问：抗体做IHC，如果呈现假阳性结果，可能的原因是什么？
  答：

  1. 抗体孵育时间过长，抗体浓度偏高；
  2. 多抗易出现非特异性，可选择单抗；
  3. 内源性过氧化物酶和生物素灭活不够；
  4. 非特异性组分与抗体结合，可延长血清封闭时间；
  5. DAB 孵育时间过长或浓度过高；
  6. PBS 冲洗不充分，残留抗体增强着色；
  7. 标本染色过程中多次出现干片；
  8. 脱蜡不充分；
  9. 二抗与标本的内源性组织蛋白有交叉反应。如果想分析具体原因，请联系support@abbkine.com进行详细探讨。

• 问：慢性疾病研究，如：动脉粥样硬化，需要研究炎症因子的分泌蛋白，是否可以使用抗体进行IHC的方法研究？
  答：

  可以，因为分泌蛋白未分泌之前会以分泌小泡的形式存在于细胞质中，可以用抗体进行结合。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

• 问：抗体中甘油的作用是什么？
  答：

  甘油是可以减慢抗体分子之间的碰撞，起到抗体保护剂的作用。

• 问：该类抗体最佳浓度应如何确定？
  答：

  预实验过程中，建议优先选择中间稀释倍数，进行预实验选择最合适的稀释比。

• 问：能做IF的抗体是否能做IFA呢？
  答：

  IFA方法是基于抗原抗体反应，建议客户尝试一下，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

• 问：Abbkine抗体可以用做抗原抗体亲和力检测吗?
  答：

  可以。

二抗

• 问：Abbkine品牌的二抗的浓度为多少呢？
  答：

  0.5 mg/mL。

• 问：抗体中甘油的作用是什么？
  答：

  甘油是可以减慢抗体分子之间的碰撞，起到抗体保护剂的作用。

• 问：普通荧光二抗能不能做WB呢？应该如何成像呢？
  答：

  荧光western blotting的结果需要特殊的仪器检测，即一种荧光成像仪器。即运用荧光成像仪可以对荧光WB的实验结果进行成像和数据采集分析。如果希望应用荧光成像做WB，建议选用Abbkine DyLight 680和DyLight 800荧光二抗，货号分别为A23710、A23720、A23910、A23920。

标签抗体

正常动物血清

• 问：Abbkine品牌的封闭血清中是否含有补体？
  答：

  Abbkine的封闭血清经过热灭活和补体灭活，不含热原、病原体和补体。

• 问：Abbkine品牌的封闭血清是否已过滤？
  答：

  0.1µm过滤除菌。

蛋白定量系列产品

内参抗体