Elikine™ ELISA Kit
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问:ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差,这是由什么原因造成的?
答:
1.样本及试剂量不准,孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致;
2. 加样过快,孔间发生污染----加样不能过快;
3. 加样本及试剂时,加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁;
4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用;
5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致;
6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。
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问:试剂盒检测一个样品孔,一般用多少样本量?
答:
稀释好的液体样本100 μL,细胞样本1-2×106个cells,组织样本1 g左右。
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问:如果Elikine系列部分产品Assay Buffer和Sample Buffer出现沉淀,是什么原因?应该如何处理?
答:
针对Elikine系列部分产品Assay Buffer和Sample Buffer出现沉淀的说明如下:
1) Elikine系列部分产品Assay Buffer和Sample Buffer中含有动物血清(目的是减少非特异性结合),个别批次可能会出现沉淀,沉淀属于正常现象,不影响产品性能;您可以建议客户尝试37℃加热溶解沉淀0.5h-1h;若不能完全溶解,可以使用过滤的方式去除沉淀后继续使用;
2) 如果您担心沉淀会影响产品性能,建议先做标准曲线验证,如果标准曲线R值大于0.99,说明该试剂盒正常,可以放心使用。
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问:该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求?
答:
可以满足,连续取的样本如果1周内检测,需保存于4℃;如1个月内检测,按一次使用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融;如6个月内检测,分装保存于-80℃,避免反复冻融。
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问:开封之后,未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间?
答:
开封的酶标板应密封后在-20度保存,能保存一个月。
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问:ELISA实验制作标曲,X轴和Y轴弄反了,是否对结果有影响?
答:
无影响,只是计算的时候需注意,样本的OD值应代入计算式的X值中。
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问:为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm?
答:
因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰,所以用酶标仪检测450nm处的OD值。
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问:该类试剂盒的指标如何查找?
答:
建议在Abbkine官网搜索“KET”,客户可以了解到相关指标。如有疑问,请联系support@abbkine.com进行详细咨询。
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问:该ELISA试剂盒是否适用于culture cells?
答:
适用,在说明书的样本处理栏可以参考culture cells的样本前处理方法。
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问:如果实验所得ELISA板的最终结果为蓝色,可能是什么原因?
答:
1.未加实验终止液;2.终止液失效。
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问:普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么?
答:
双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后再加酶标记抗体,与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原含量。
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问:样本前处理:血加在抗凝管后,离心出来的是血清还是血浆?
答:
血浆。
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问:该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀,应如何处理?
答:
为了避免基质效应,ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液,特别是血清稀释液的配方中,会含有一些动物蛋白成分(比如 BSA)和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下,会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中,我们研发人员开展的大量验证实验表明,稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。
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问:该类试剂盒是否与DS2 ELISA自动检测机器兼容?
答:
可以兼容。
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问:如何用ELISA Kit辨别阳性阴性?
答:
关于临界值的问题,请参见以下内容:
取一定量(通常少量即可)的阴性血清样品,使用一些孔进行测试,临界值是阴性血清样品的平均值乘以2或3。
Exkine™蛋白提取系列
Linkine™蛋白偶联试剂盒
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问:如果想重复使用偶联试剂盒里配备的超滤管超滤管,该怎么操作?
答:
1. 用吸头吸取一定量的0.1 mol的NaOH清洗滤膜1-2次,目的是洗去滤膜上残留的物质;
2. 用双蒸水冲洗滤膜2-3次,目的是洗去NaOH;
3. 将超滤管浸泡在20%乙醇里,直至下次使用,目的是抑菌,防止滤膜干燥,滤膜干燥后会造成滤膜性能丧失。
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问:偶联试剂盒里配备的超滤管是否可以重复使用?
答:
不建议重复使用的,重复使用可能会导致超滤管的性能降低。
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问:待偶联物是IL-10,分子量是18.6 kD,估计是要偶联1 mg的蛋白,应该选择哪个规格型号?
答:
推荐1 mg的规格,选用超滤管3K的超滤管的型号。
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问:该试剂盒是多物种通用型吗?
答:
是通用型的。
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问:多少样本可以偶联上标记物?
答:
如按照说明书的操作进行实验,可保证超过90%的偶联效率。
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问:怎么判断蛋白上是否有游离的氨基?
答:
如果是普通蛋白分子的话,查询蛋白的氨基酸一级结构就可以知道是否有游离氨基。
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问:怎么判断样本偶联成功?
答:
做吸光度检测和免疫实验检测。
Purkine™蛋白纯化工具
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问:蛋白纯化后的蛋白用于动物体口服应如何调节浓度?
答:
可用生理盐水置换靶蛋白中的洗脱液,用蛋白浓度测定仪检测浓度,再加生理盐水调节蛋白浓度。
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问:纯化之后的样本中如果存在少量低分子量杂带,是什么原因?应如何解决?
答:
如果低分子量条带在原液中不存在,说明是在纯化过程中,靶蛋白出现降解,建议在低温下进行。去除保护液和洗杂的流速可以快一些,但是上样和洗脱的速度尽量不加快。
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问:纯化试剂盒纯化之后出现低分子量杂带在Input样本中不存在,可能是什么原因?应如何避免?
答:
小分子杂蛋白是在纯化过程中的靶蛋白降解产物,建议客户纯化过程低温下进行,同时样本采用新鲜样本,同时纯化过程尽量在4度进行,去除保护液和洗杂的流速可适当加快。如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
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问:预装柱填料中是否含内毒素?
答:
本公司的纯化填料中含有微量内毒素,如果客户样品对内毒素有要求,建议用曲拉通将内毒素萃取出来。
一抗
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问:抗体按1:200-1:500稀释,免疫组化的30ul抗体可以做几张片子?
答:
180-300张片子。如对具体计算方法有疑问,请联系support@abbkine.com进行详细咨询。
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问:做WB时,如果靶蛋白跑条带有连接现象。这种现象可能的原因是什么?
答:
1. 样品离子浓度高;2. 上样量过大;3. 上样与跑电泳之间的间隔太长;4. 电泳时电压太高,发热导致扩散。
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问:抗体做IHC,如果呈现假阴性结果,可能的原因是什么?
答:
1. 抗体浓度偏低,质量不佳以及抗体来源选择错误;
2. 抗原修复不全,换修复液或加强修复;
3. 组织切片本身这种抗原含量低,设阳性对照片;
4. 血清封闭时间过长;DAB 孵育时间过短;
5. 细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应。如果想知道具体原因,请联系support@abbkine.com进行详细探讨。 -
问:抗体做IHC,如果呈现假阳性结果,可能的原因是什么?
答:
1. 抗体孵育时间过长,抗体浓度偏高;
2. 多抗易出现非特异性,可选择单抗;
3. 内源性过氧化物酶和生物素灭活不够;
4. 非特异性组分与抗体结合,可延长血清封闭时间;
5. DAB 孵育时间过长或浓度过高;
6. PBS 冲洗不充分,残留抗体增强着色;
7. 标本染色过程中多次出现干片;
8. 脱蜡不充分;
9. 二抗与标本的内源性组织蛋白有交叉反应。如果想分析具体原因,请联系support@abbkine.com进行详细探讨。 -
问:慢性疾病研究,如:动脉粥样硬化,需要研究炎症因子的分泌蛋白,是否可以使用抗体进行IHC的方法研究?
答:
可以,因为分泌蛋白未分泌之前会以分泌小泡的形式存在于细胞质中,可以用抗体进行结合。如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
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问:抗体中甘油的作用是什么?
答:
甘油是可以减慢抗体分子之间的碰撞,起到抗体保护剂的作用。
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问:该类抗体最佳浓度应如何确定?
答:
预实验过程中,建议优先选择中间稀释倍数,进行预实验选择最合适的稀释比。
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问:能做IF的抗体是否能做IFA呢?
答:
IFA方法是基于抗原抗体反应,建议客户尝试一下,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
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问:Abbkine抗体可以用做抗原抗体亲和力检测吗?
答:
可以。
二抗
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问:Abbkine品牌的二抗的浓度为多少呢?
答:
0.5 mg/mL。
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问:抗体中甘油的作用是什么?
答:
甘油是可以减慢抗体分子之间的碰撞,起到抗体保护剂的作用。
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问:普通荧光二抗能不能做WB呢?应该如何成像呢?
答:
荧光western blotting的结果需要特殊的仪器检测,即一种荧光成像仪器。即运用荧光成像仪可以对荧光WB的实验结果进行成像和数据采集分析。如果希望应用荧光成像做WB,建议选用Abbkine DyLight 680和DyLight 800荧光二抗,货号分别为A23710、A23720、A23910、A23920。
标签抗体
正常动物血清
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问:Abbkine品牌的封闭血清中是否含有补体?
答:
Abbkine的封闭血清经过热灭活和补体灭活,不含热原、病原体和补体。
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问:Abbkine品牌的封闭血清是否已过滤?
答:
0.1µm过滤除菌。