史上最全的凋亡检测解说！

细胞凋亡（程序性细胞死亡）在细胞形态和细胞生理上都不同于细胞坏死（损伤性细胞死亡）。与坏死细胞不同，凋亡细胞表现出细胞核染色质紧密、细胞质收缩以及产生膜结合的凋亡小体，而且细胞凋亡还可通过基因断裂以及多种细胞蛋白裂解或降解来与细胞坏死区分。细胞凋亡的失调与多种疾病也相关，包括癌症、中风、阿尔茨海默病和多种自身免疫性疾病。细胞的凋亡检测在多种研究领域中都占有重要的地位。面对多种检测凋亡检测方法，到底要如何根据自己的实验方案选择最合适的方法？基于什么原理？小编带您解开疑惑。

一、基于细胞功能（Annexin V法、线粒体膜电位检测）

1、细胞膜表面磷脂酰丝氨酸检测

磷脂酰丝氨酸在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2⁺依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来（相关产品推荐：KTA0002）

线粒体膜势能的检测。

2、线粒体膜电位检测

细胞凋亡有个典型特征是线粒体活性受损，包括膜电位丧失和线粒体氧化还原能力改变。发生这些的主要原因是线粒体通透性转换孔被打开了，使得离子和小分子可以通过，以及释放了细胞色素C。较常见的方法是通过检测线粒体膜电位确定细胞的凋亡情况（推荐产品货号：KTA4001）。

二、基于生化标记（凋亡分子、DNA损伤）

1、DNA损伤检测

生化标记的方法中，TUNLE法是较常用、较准确的方法。TUNLE染色即原位末端转移酶标记技术。凋亡细胞的DNA双链断裂或一条链出现缺口，产生一系列3’-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)作用下，将脱氧核糖核苷酸和生物素所形成的衍生物标记到DNA的3′末端，从而进行凋亡细胞的检测。TUNLE染色是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确的反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征（相关产品推荐：KTA2010）。

2、凋亡分子标记检测

细胞凋亡途径，是由一套明确的信号通路层层调控的。在绝大多数情况下，所有的凋亡信号都会汇集到凋亡的最终执行者Caspase-3之上。上游的凋亡信号通过切割Caspase-3，使其具备酶活，并执行最后的凋亡程序。可以通过WB实验、生化检测、IHC等方法确定Caspase的表达量（相关产品推荐：KTA3020、KTA3022等）。

三、基于形态学的方法

1、电子显微镜检查

“凋亡”最早是一个细胞形态学概念。因此，鉴定凋亡的金指标，往往是基于形态学的。尽管电镜检查是鉴定凋亡的金标准，然而其缺点也很明显：无法定量（电镜一个视野仅能观察一两个细胞），实验步骤繁琐；且电镜设备昂贵，不普遍。因此，对于不专门研究凋亡这种细胞现象的实验室来说，基本没有人选择电镜来检测凋亡了。

2、细胞核形态染色

细胞凋亡时染色质浓聚，且细胞核结构在凋亡后期崩解。用荧光染料配合普通的荧光显微镜即可观察到细胞核的状态，以此判断细胞凋亡的情况。Abbkine提供荧光染料BMD0063、BMD0062。

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