一、WB主要实验流程

WB 实验流程主要包括样本制备、电泳、转膜、封闭、抗体孵育、膜的清洗和检测 6 个部分。环环相扣的6个部分中每一步出现问题都可能导致整个实验失败。

 繁多的实验流程，注定需要准备多样的实验试剂，耗费大量的准备时间，是否还在为众多试剂的准备头痛不已

 Abbkine一套盒子帮您搞定WB——通用型免疫印迹（WB）工具箱

组分齐全，品质极佳

工具箱包含：

1. 经优化的裂解液，可满足样本 WB 需求；
2. 即用型电泳缓冲液、转膜液、TBST、BSA开盒即可开始实验；
3. 即用型 WB 阳性对照，直接上样；
4. SuperKine™ 超敏型 ECL 发光液（飞克级），高灵敏度的显色液，增强化学信号 ；
5. 10-180 kDa彩色预染蛋白Marker、SDS-PAGE Loading Buffer及2张PVDF膜；
6. 所需各类抗体：GAPDH内参抗体、HRP, Goat Anti-Mouse IgG、HRP, Goat Anti-Rabbit IgG

配备专业的技术支持团队，为您的实验保驾护航

二、WB实验问题多？

理想的WB实验结果:

完美的目的条带

干净的胶图背景

高丰度的表达蛋白

实际的WB实验问题多

背景偏高

​​原因1：未进行非特异性封闭或封闭不充分

建议：延长封闭时间，考虑更换合适的封闭剂。推荐5%脱脂奶粉、3% BSA或血清封闭 30 分钟。

原因2：一抗浓度过高

建议：稀释抗体至合适浓度，增大抗体稀释比，延长抗体孵育时间。

原因3：孵育温度过高

建议： 4 ℃ 下孵育。

原因4：二抗与封闭剂非特异性结合或反应

建议：设置二抗对照(不加一抗)。

多带现象

原因1：细胞传代次数过多，使其蛋白表达不同

建议：使用原始未传代的细胞株，和现在的细胞株一起做平行对照实验。

原因2：体内表达的蛋白样本具有多种修饰形式如乙酰化、甲基化、烷基化、磷酸化、糖基化等

建议：查阅文献，使用试剂使样品去磷酸化、去糖基化来验证翻译后的修饰。

原因3：蛋白样本降解（结果蛋白质分子量低于实际分子量）

建议：在样品缓冲液中加入足够的蛋白酶抑制剂。

原因4：一抗浓度过高，高浓度时常出现多条蛋白带

建议：降低抗体浓度和/或孵育时间。

原因5：抗体未经纯化

建议：使用亲和纯化的抗体，减少非特异条带。

原因6：靶蛋白形成多聚体

建议：SDS-PAGE 电泳上样前，延长煮沸时间，煮沸 10 分钟，使蛋白质解聚。

Abbkine WB系列试剂可免除您WB实验后顾之忧，配合使用通用型免疫印迹（WB）工具箱让您的WB实验更加便捷省心！

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赋能细胞研究与治疗 Enabling cell research and therapy

亚科因生物技术有限公司（Abbkine Biotechnology Co., Ltd）成立于2017年，总部位于中国武汉。公司致力于细胞科研检测及细胞治疗领域关键试剂的研发、生产和销售，成为全球细胞制药领域创新的关键推动者。公司主营业务包括细胞培养、扩增及储存试剂，细胞代谢、检测及分选试剂盒，细胞治疗用原料及细胞因子等产品及定制化服务。围绕生物试剂研发，亚科因生物已建立了稳定完善的两大关键技术平台：生化试剂配方和重组蛋白表达进化平台，为细胞科研检测及细胞治疗核心试剂的高通量、高效率研发生产提供保障。