原理

当各种内外源DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，DNA的超螺旋结构受到破坏，采用化学方法使细胞膜、核膜破裂，细胞内的蛋白质、RNA以及其它成分均扩散到细胞裂解液中，而核DNA由于分子量太大只能留在原位。在碱处理和碱性电解质的作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及片段被释放出来，在电泳过程中会离开核DNA向阳极移动，形成彗星状的图像，而未损伤的DNA部分保持球形。DNA受损越严重，产生的断片越多并且片段越小，电泳时迁移的DNA量也就越大，荧光显微镜下可观察到尾部荧光强度增强。

产品优势

• 试剂齐全可靠：提供特色涂层多孔彗星玻片，增加凝胶与载玻片粘附力，有效降低脱胶风险
• 操作简便：无需用不同熔点琼脂糖繁琐铺胶，可快速、灵敏的检测细胞 DNA 损伤；
• 实验步骤
• 制备单细胞悬浮液，在 37℃ 条件下，悬浮液与低熔点琼脂糖（LM琼脂糖）混合；
• 将琼脂糖、细胞混合物涂布在预处理的载玻片上；
• 4℃条件下用裂解液处理30-60min或过夜，裂解液由去垢剂及高盐溶液组成，可去除多余的细胞膜及组蛋白；
• 将载玻片浸入电泳溶液中；
• 进行凝胶电泳，随后，中和载玻片，待LM琼脂糖完全干燥后，用荧光染料染色，并于荧光显微镜下观察DNA损伤程度。
• 数据处理
• 在拍照时以tif格式保存图片，然后用CASP彗星分析软件分析，如下图是软件打开的界面➙
• 接下来➙导入图片，用白色画框选中要分析的区域。下图中的“调整”项可以调整画框的位置以包含整个细胞，开始分析前要点击“开始”，然后点“分析”，再点“保存”，这样一张图的数据就分析完了，数据会保存在系统里。点击“翻页”可以继续分析下一张图。
  
• 分析完所有图片后导出数据到Excel表格，保留TailDNA%（尾部DNA百分含量），TailLength（尾长），TailMoment（尾矩）三列数据。根据细胞尾部的DNA百分含量（即TailDNA%），将采集的细胞图像分为5级：彗星尾部荧光强度（TailDNA%）占总强度为0-6%是0级；6.1%-17.0%是1级；17.1%-35.0%是2级；35.1%-60.0%是3级；60.1%-100.0%是4级。
• 彗星率等于彗星细胞数目（除去0级细胞）占总细胞数目的百分比。任意值等于各等级细胞的百分比与其对应的级别号的乘积之和，它可以综合反映细胞的DNA损伤情况。最后，综合分析Tail DNA%、Tail length、Tail moment、彗星率和任意值，共5个指标比较细胞的DNA损伤程度。
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