解锁细胞生命密码：CCK-8 法检测全攻略
发布时间：2025-02-19
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在生命科学的微观探索中，细胞增殖与毒性检测至关重要。无论是药物研发时探究新药对病变细胞的作用，还是研究环境因素对正常细胞的影响，都离不开精准的检测手段。而细胞增殖 / 毒性检测试剂盒（CCK-8 法），就像是一把神奇的钥匙，为我们开启了深入了解细胞生命状态的大门。现在，就让我们一起走进 CCK-8 法的检测世界。
前期准备：筑牢实验根基
实验前，挑选状态良好、处于对数生长期的细胞。这时期的细胞活力满满，就像充满电的小马达，能保证实验结果的可靠性。比如培养肿瘤细胞，要依据其特性，选择适配的培养基，再添加血清、抗生素等，为细胞营造舒适的 “小窝”。同时，准备好 96 孔细胞培养板、移液器、枪头和 CCK-8 试剂等。注意，96 孔板得选利于细胞贴壁的，所有耗材都要严格消毒，杜绝杂质干扰实验。
细胞接种：开启微观实验
把对数生长期的细胞，用胰蛋白酶温柔消化后，制成均匀的单细胞悬液。这就好比把聚集的人群分散开，让每个细胞都能自由 “活动”。接着，用移液器将细胞悬液精准接种到 96 孔板中，每孔的细胞数量得依据预实验和实验目的来定。一般来说，细胞增殖实验每孔约 2000 个细胞，细胞毒性实验每孔约 5000 个细胞 。接种完，轻轻摇匀 96 孔板，让细胞均匀分布，随后放入细胞培养箱，耐心等待细胞贴壁。
加药与检测：探寻细胞秘密
等细胞贴壁后，就到加药环节了。若是研究药物对细胞的毒性，需将不同浓度的药物加入对应孔中，同时设置不加药物的对照组，就像给实验设置了参照标准。加药时，要避免产生气泡，保证药物均匀分散。加药后继续放回培养箱孵育。
孵育结束，关键的 CCK-8 试剂登场。按照说明书，每孔加入适量试剂，轻轻混匀，别让气泡捣乱。之后再放入培养箱孵育 1 - 4 小时，具体时长可通过预实验确定。在这个过程中，细胞内的脱氢酶会与 CCK-8 试剂里的 WST-8 发生奇妙反应，生成橙黄色的甲瓒 。活细胞越多，甲瓒就越多，颜色也就越深。
结果分析：解读细胞语言
孵育完成，将 96 孔板放入酶标仪，设置检测波长为 450nm，酶标仪会精准检测每孔吸光度值。通过分析对照组和实验组的吸光度数据，就能计算出细胞存活率、增殖抑制率等关键指标。比如，对比实验组和对照组吸光度，若实验组明显更低，说明药物抑制了细胞增殖；反之，则可能有促进作用。
CCK-8 法检测流程虽步骤繁杂，但只要严格遵循操作流程，就能精准洞察细胞的增殖与毒性状态，为生命科学研究提供坚实的数据支撑，助力我们不断探索生命的微观奥秘。
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