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WB专题|通用型免疫印迹(WB)工具箱

发布时间:2022年09月15日 浏览次数:91

一、WB主要实验流程

WB 实验流程主要包括样本制备、电泳、转膜、封闭、抗体孵育、膜的清洗和检测 6 个部分。环环相扣的6个部分中每一步出现问题都可能导致整个实验失败。

 繁多的实验流程,注定需要准备多样的实验试剂,耗费大量的准备时间,是否还在为众多试剂的准备头痛不已

 Abbkine一套盒子帮您搞定WB——通用型免疫印迹(WB)工具箱

组分齐全,品质极佳

工具箱包含:

  1. 经优化的裂解液,可满足样本 WB 需求;
  2. 即用型电泳缓冲液、转膜液、TBST、BSA开盒即可开始实验;
  3. 即用型 WB 阳性对照,直接上样;
  4. SuperKine™ 超敏型 ECL 发光液(飞克级),高灵敏度的显色液,增强化学信号 ;
  5. 10-180 kDa彩色预染蛋白Marker、SDS-PAGE Loading Buffer及2张PVDF膜;
  6. 所需各类抗体:GAPDH内参抗体、HRP, Goat Anti-Mouse IgG、HRP, Goat Anti-Rabbit IgG

配备专业的技术支持团队,为您的实验保驾护航

 

二、WB实验问题多?

理想的WB实验结果:

完美的目的条带

干净的胶图背景

高丰度的表达蛋白

实际的WB实验问题多

背景偏高

​​原因1:未进行非特异性封闭或封闭不充分

建议:延长封闭时间,考虑更换合适的封闭剂。推荐5%脱脂奶粉、3% BSA或血清封闭 30 分钟。

原因2:一抗浓度过高

建议:稀释抗体至合适浓度,增大抗体稀释比,延长抗体孵育时间。

原因3:孵育温度过高

建议: 4 ℃ 下孵育。

原因4:二抗与封闭剂非特异性结合或反应

建议:设置二抗对照(不加一抗)。

 

多带现象

原因1:细胞传代次数过多,使其蛋白表达不同

建议:使用原始未传代的细胞株,和现在的细胞株一起做平行对照实验。

原因2:体内表达的蛋白样本具有多种修饰形式如乙酰化、甲基化、烷基化、磷酸化、糖基化等

建议:查阅文献,使用试剂使样品去磷酸化、去糖基化来验证翻译后的修饰。

原因3:蛋白样本降解(结果蛋白质分子量低于实际分子量

建议:在样品缓冲液中加入足够的蛋白酶抑制剂。

原因4:一抗浓度过高,高浓度时常出现多条蛋白带

建议:降低抗体浓度和/或孵育时间。

原因5:抗体未经纯化

建议:使用亲和纯化的抗体,减少非特异条带。

原因6:靶蛋白形成多聚体

建议:SDS-PAGE 电泳上样前,延长煮沸时间,煮沸 10 分钟,使蛋白质解聚。

 

Abbkine WB系列试剂可免除您WB实验后顾之忧,配合使用通用型免疫印迹(WB)工具箱让您的WB实验更加便捷省心!

产品推荐:

货号 名称 规格 价格
KTD3003 SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5×) 10 mL ¥139
BMM3001 彩色预染蛋白质Marker (10-180kDa) 100μL/250μL*2/250μL*2 ¥216/639/4978
BMU102-CN SuperKine™ 超敏型ECL发光液(飞克级) 100 mL /200 mL ¥298/898
BMU103-CN SuperKine™ 增强型抗体稀释液 100 mL /500 mL ¥198/598
KTD106-CN 通用型免疫印迹(WB)工具箱 20 T ¥298
BMP2020 WB及IP裂解液 100 mL ¥139
BMP2010 WB裂解液 100 mL ¥169
BMU105-CN SuperKine™ 超快蛋白胶染色液(考马斯亮蓝) 250 mL *2 ¥198

 

我们将持续更新更多WB相关技术前沿资讯,敬请期待!

Abbkine的技术专家为了给广大读者提供学习生物知识的平台,经过不懈努力,将多种高端生物实验的干货整理出来,后期陆续在微信公众号中刊登,请广大热爱科学的读者持续关注Abbkine公众号。

 

细胞和蛋白研究工具(Cell and protein research tools)

Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

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