【新品上新】测DNA损伤，你还可以这样做
发布时间：2024-02-27
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应用背景和原理
彗星实验（Comet assay）是一种在单细胞水平上检测DNA损伤的技术。当各种内源性和外源性 DNA 损伤因子诱发细胞 DNA 链断裂时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA 以及其他成分均扩散到电解液中，而核DNA由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。电泳过程中，如果DNA没有损伤，则将停留在原位，染色后呈圆形的荧光团，无拖尾出现。如果DNA受损，断裂的碎片进入到凝胶中，在电场的作用下，DNA碎片离开原位向阳极迁移，形成拖尾。
彗星实验能有效地检测并定量分析细胞中DNA单，双链缺口损伤的程度。当各种内源性和外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到电解液中，而核DNA由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。
在中性条件下，DNA片段可进入凝胶发生迁移，而在碱性电解质的作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及片段被释放出来。由于这些DNA的分子量小且碱变性为单链，所以在电泳过程中带负电荷的DNA会离开核DNA 向正J迁移形成“彗星”状图像，而未受损伤的DNA部分保持球形。
DNA受损越严重，产生的断链和断片越多，长度也越大，在相同的电泳条件下迁移的DNA量就愈多，迁移的距离就愈长。通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个细胞DNA损伤程度，从而确定受试物的作用剂量与DNA损伤效应的关系。
该法检测低浓度遗传毒物具有高灵敏性，研究的细胞不需处于有丝分裂期。同时，这种技术只需要少量细胞。
实验步骤
制备单细胞悬浮液，在 37℃ 条件下，悬浮液与低熔点琼脂糖（LM琼脂糖）混合；
将琼脂糖、细胞混合物涂布在预处理的载玻片上；
4℃条件下用裂解液处理30-60min或过夜，裂解液由去垢剂及高盐溶液组成，可去除多余的细胞膜及组蛋白；
将载玻片浸入电泳溶液中；
进行凝胶电泳，随后，中和载玻片，待LM琼脂糖完全干燥后，用荧光染料染色，并于荧光显微镜下观察DNA损伤程度。
产品优势
试剂齐全：提供独特的彗星玻片；
操作简便：无需用不同熔点琼脂糖繁琐铺胶，可快速、灵敏的检测细胞 DNA 损伤；
可靠：相比于多层琼脂糖，样本不易脱落。
实验效果展示
Fig.用Abbkine 彗星试剂盒检测Jurkat细胞的DNA 损伤，并和A品牌进行比较。Abbkine 彗星试剂盒检测不仅步骤更简便，省时高效，且荧光较亮，样本不易脱落，可形成稳定鲜亮的结果。
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