Abbkine通用型免疫（共）沉淀（IP/Co-IP）工具箱提供IP全流程试剂组分，包括制备蛋白样本的非变性裂解液、蛋白酶抑制剂、IgG阴性对照、变性洗脱液及非变性洗脱液、轻链特异性二抗（规避重链）等，组分齐全，省时省力，可满足广大用户IP/Co-IP实验广泛的需求，一个盒子搞定IP实验。在使用过程中常有小伙伴不清楚IgG阴性对照是什么，怎么使用？看完这篇你就全都搞清楚啦！

什么是阴性对照？

作为与IP捕获抗实验组相对应的阴性对照组，理论上IgG并不能特异性的与任何蛋白结合，可选用与IP捕获抗体相同物种来源的同型IgG作为阴性对照。

设置阴性对照的意义是什么？

当IgG阴性对照杂出了除轻重链以外的信号时，则说明样本中存在与IgG非特异性结合的蛋白。设置阴性对照可以用于排除样本中非特异性与IgG结合的蛋白，消除样本背景，排除假阳性。

IgG阴性对照如何使用？

IgG作为一个独立的对照组（是IP一抗的对照）需要做与实验组完全相同的操作。简单来讲就是把它当作我们的IP捕获抗体去做整个IP实验流程，在后续的WB检测时，其IP产物作为一个独立样本同实验组IP产物一同进行上样检测。

阴性对照有非特异性结合如何去除？

当样本出现严重的非特异性结合，可以通过将样本与磁珠进行预结合，使用预结合处理后的样本进行后续常规的IP操作。

图1. IgG与样本非特异性结合（中色箭头指示）

图2. 正常的IgG阴性对照

Abbkine建议的去除非特异性结合步骤

(1) 取20 μL的Protein A/G Magnetic Beads加入到1.5 mL 离心管中，离心管置于磁分离架上，静置10 s，吸弃上清。

注意：Protein A/G Magnetic Beads 使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。

(2) 加入1 mL 1×Wash Buffer，重悬 Protein A/G Magnetic Beads，离心管置于磁分离架上，静置 10 s，吸弃上清，重复 3 次。

(3) 加入0.2-1 mL（0.2-1 mg）蛋白样品，4℃摇转孵育30 min。（推荐用垂直旋转混合仪，低速旋转）

(4) 离心管置于磁分离架上，静置 10 s，取上清用于后续的免疫沉淀

看完以上内容，小伙伴们有对IP实验中的IgG阴性对照有了更深刻的认识吗？是不是对IP实验更有信心了呢？小编在这里祝大家IP实验一切顺利啦！

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