【新品解读】细胞培养如何避坑?大神带你玩转细胞实验
在做细胞学实验之前,大家首先要面临的问题就是细胞培养,养细胞看起来简单做起来难。虽说流程就寥寥几步,但稍不留神,细胞就不明不白“闹起脾气”。不是细胞污染,就是活力不佳,再或长着长着就不再是最初的模样。
对于养细胞的人来说
可谓是谈“污”色变
每次养细胞总让人有种神经错乱
一进细胞房就想让空气都静止下来
打开培养皿的一瞬间
连呼吸都变得如此多余
只要有任何异样
无论是支原体还是杂菌
污染!污染!污染!
犹如细胞实验的魔咒,
让一切都无限重复……
为了解决养细胞的难题,Abbkine经过持续努力,不断开发一系列的细胞培养试剂,为大家带来细胞培养的一站式解决方案,包括:
一、多种实验室常用培养基,价廉物美,物超所值。在 MEM 细胞培养基的基础上研制的,与 MEM 相比增加了各种成分用量:
1.用 0.1 μm 滤膜过滤除菌,无需高温高压灭菌,营养物流失少,开瓶即用;
2.多种成分组合的细胞培养基,满足各类需求;
3.适用于多种哺乳动物细胞培养,包括成纤维细胞、神经元细胞、神经胶质细胞、平滑肌细胞,以及 HeLa、293、Cos-7 和 PC-12 等细胞系。
二、细胞消化所需的胰酶,SuperKine™ 胰酶细胞消化液(0.25%胰酶)含0.25%胰酶和0.06%EDTA, pH值为7.2-7.4。该消化液经过过滤除菌,即用型可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化,具有明显优势:
1.安全性高:无支原体、内毒素等污染;
2.高品质:经过多种样本和不同细胞验证,快速消化。
三、细胞冻存需要用到的冻存液,SuperKine™ 快速细胞冻存液(无血清/无蛋白)是一种配方成分明确、无血清、无蛋白的适用于绝大部分的哺乳动物细胞的非程序化冻存即用型细胞冻存液。
1.省时省力:即用型,非程序化冻存;
2.安全性高:成分明确,无血清,无蛋白,避免病毒、细菌、支原体等污染;
3.高品质:经过多种细胞验证,细胞复苏存活率高。
四、细胞培养过程中的营养物质胎牛血清。牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成分,常用于细胞的体外培养。本产品的pH值、渗透压、血红蛋白浓度、内毒素水平、总蛋白等多项指标检测合格;低内毒素,无细菌、支原体、噬菌体、病毒等污染;不含任何人为的添加成分,不含激素、抗生素等,可应用于各种常规的细胞培养,为细胞提供必须的营养物质和多种生长因子,有效促进细胞生长。本产品已通过0.1μm过滤除菌,4°C低温缓慢解冻后即可使用。
相关产品推荐
产品名称 | 货号 | 规格 |
SuperKine™ 快速细胞冻存液(无血清/无蛋白) | BMU108-CN | 100 T/1000 T |
SuperKine™ 胰蛋白酶消化液(0.25%胰酶,含酚红) | BMU109-CN | 100 mL |
SuperKine™ 胰蛋白酶消化液(0.25%胰酶,不含酚红) | BMU110-CN | 100 mL |
DMEM高糖培养基(含酚红) | BMC1010 | 500 mL |
RPMI-1640培养基(含酚红) | BMC1011 | 500 mL |
特级胎牛血清 | BMC1020 | 500 mL |
小编经过长期倾听用户的心声,为大家收集了一批细胞培养的常见问题和解决办法,为细胞学实验打下坚实的基础。
问题 | 可能原因 | 解决办法 |
培养液pH 值变化太快
| CO2张力不对 | (1)按培养液中 NaHCO3浓度增加或减少培养箱内COz浓度,2.0gL到3.7g/L浓度NaHCO:对应CO2浓度为5%到10%。 (2)改用不依赖CO,培养液。 |
培养瓶盖拧得太紧。 | 松开瓶盖1/4圈。 | |
NaHCO3缓冲体系缓冲力不足 | 加HEPES缓冲液至10到25mM 终浓度。
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培养液中盐浓度不正确 | 在CO2,培养环境中改用基于 Earle' s盐配制的培养液,在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。 | |
细菌、酵母或真菌污染 | 丢弃培养物。或用抗生素除菌。 | |
培养液出现沉淀,但pH不变 | 用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来 | 用去离子水反复冲洗玻璃器皿,然后除菌。
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冰冻保存培养液 | 将培养液加热到37℃,摇动使其溶解如沉淀仍然存在,丢弃培养液。 | |
培养液出现沉淀同时pH发生变化 | 细菌或真菌污染 | 丢弃培养物。或用抗生素除菌。
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培养细胞不贴壁 | 胰蛋白酶消化过度 支原体污染 培养液中无贴壁因子 | 缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。 分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。 |
悬浮细胞成 簇 | 培养液中含钙、镁离子 支原体污染 蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放DNA | 用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞,轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。 分离培养物,检测支原体。如发现支原体污染,丢弃培养物。 用DNase Ⅰ处理细胞。 |
原代细胞培养物污染 | 原代培养组织在进入培养前已污染 | 培养前用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织。 |
培养细胞生长减慢 | 由于更换不同培养液或血清 | 比较新培养液与原培养液成分,比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。 增加起始培养细胞浓度。 |
培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。 | 让细胞逐渐适应新培养液。 换入新鲜配制培养液。 补加谷氨酰胺或生长因子。
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培养物中有少量细菌或真菌污染 | 用无抗生素培养液培养,如发现污染,丢弃培养物。或用抗生素除菌。 | |
试剂保存不当 | 血清需保存在-5℃到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存,并在2周内用完。 | |
接种细胞起始浓度太低 | 增加接种细胞起始浓度。 | |
细胞已老化 | 换用新的保种细胞。 | |
支原体污染 | 分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。 | |
培养细胞死亡 | 培养箱内无CO2 | 检测培养箱内CO2 |
培养箱内温度波动太大 | 检查培养箱内温度 | |
细胞冻存或复苏过程中损伤 | 取新的保存细胞种 | |
培养液渗透压不正确 | 检测培养液渗透压。注意:大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260 - 350 mOsm/kg。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。 | |
培养液种有毒代谢产物堆积 | 换入新鲜培养液
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接种细胞起始浓度太低 | 增加接种细胞起始浓度。 | |
细胞已老化 | 换用新的保种细胞。 | |
支原体污染
| 分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。 |
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亚科因生物技术有限公司(Abbkine Biotechnology Co., Ltd)成立于2017年,总部位于中国武汉。公司致力于细胞科研检测及细胞治疗领域关键试剂的研发、制造和销售,成为全球细胞制药领域创新的关键推动者。公司主营业务包括细胞培养、扩增及储存试剂,细胞代谢、检测及分选试剂盒,细胞治疗用原料及细胞因子等产品及定制化服务。围绕生物试剂研发,亚科因生物已建立了稳定完善的两大关键技术平台:生化试剂配方和重组蛋白表达进化平台,为细胞科研检测及细胞治疗核心试剂的高通量、高效率研发生产提供保障。