谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与活性氧（ROS）反应，生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。GSH-Px的活性中心是硒半胱氨酸，硒是GSH-Px的必需部分，测定GSH-Px的活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。CheKine™ 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性检测试剂盒提供了一种简单的检测方法，用于检测生物样本，如血清（浆）、动物组织、细胞、细菌样本中GSH-Px的活性。GSH-Px催化H2O2氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。  

·酶标仪或紫外分光光度计（能测340 nm处的吸光度）

·恒温箱

·96孔UV板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头

·低温离心机

·去离子水

·匀浆器（如果是组织样本）

Assay Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Working Substrate：临用前配制，Substrate加入20 mL Assay Buffer，充分溶解；未用完的试剂分装避光于-20℃保存1个月。

GR：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

Working H2O2：临用前配制，吸取21.5 μL H2O2加入5 mL去离子水，充分混匀，配制好的试剂当天使用；4℃避光保存。

Working Reagent：临用前配制，根据样本数量，按照2 mL Working Substrate加入1 μL GR的比例配制，再加6 mL的Assay Buffer混匀（当天用完）；Working Regent在25℃（其他物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30 min以上。

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。

1. 组织样本：用冷的PBS清洗组织，尽可能去除血液。吸干组织上的水分，称重。称取0.1 g组织样本，加入1 mL预冷的Assay Buffer，快速冰上匀浆。匀浆后的样本，10,000 g，4℃离心10 min，取上清液，置冰上待测。

2. 血清（浆）：直接测定（如需要可用生理盐水稀释不同倍数）。

3. 细胞、细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1 mL预冷的Assay Buffer，冰浴超声波破碎细胞或细菌5 min（功率20%或200 W，超声3 s，间隔7 s，重复30次），然后10,000 g，4℃离心10 min，取上清液，置冰上待测。

注意：样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力；细胞中GSH-Px活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中GSH-Px的提取时可加Assay Buffer后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。如需测定蛋白浓度，推荐使用Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。

1. 酶标仪或紫外分光光度计预热30 min以上，调节波长至340 nm，紫外分光光度计用去离子水调零。

2. Working Regent于 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）孵育30 min。