细胞培养技术历经一个多世纪的发展，现在已成为生命科学领域越来越重要的实验技术之一。由于细胞的特殊性，在细胞培养过程中，或在细胞建株和建系过程中，随着传代次数的增加，细胞的各种生物特性都会逐渐发生变化。因此，原始细胞种子的及时保存就显得尤为必要。

细胞冻存要取得好的效果，多采用血清、甘油或二甲基亚砜（DMSO）等作为保护剂，最大限度的保存细胞活力。这些物质有些能提高细胞膜对水的通透性，在缓慢冷冻过程中可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。同时，有些保护剂在细胞外也能减轻溶液中高浓度溶质对细胞的损伤，进一步避免细胞在冷冻和复苏过程中受到损伤。渗透性保护剂DMSO和非渗透性保护剂血清（主要含白蛋白）是使用最为广泛，效果最为稳定可靠的。DMSO对细胞存在一定的毒性，用量受到限制，降低或者不使用DMSO，寻找其它替代物是最好的选择。但是目前，该技术领域还未发现冻存保护效果能与DMSO媲美的物质。

此外，采用“慢冻快融”的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1到-2℃/分钟，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。复苏细胞采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

现有冻存方法存在的问题：

1、DMSO虽然对冻存细胞具有保护作用，但对细胞存在一定的毒性，用量受到限制，降低或者不使用DMSO，寻找其它替代物是最好的选择。因此，联合其它成分，形成新的配方，降低DMSO的含量就成了目前最佳的选择。

2、血清，即使是纯化得到的白蛋白，由于其动物来源的特性，会极大增加带来病毒等感染物质的可能。而且，血清来源受限，价格昂贵，所以其使用也必然会受到越来越多的限制。且血清的加入，将对培养基不同批次的差异造成影响。

3、目前，最成熟和最稳定的冻存细胞技术是将加有保护剂的细胞悬液置于-196℃液氮中，这样可以使细胞暂时脱离生长状态而保持细胞的特性，在需要的时候经过复苏程序，使得细胞重新生长增殖以用于实验。细胞储存在-196℃液氮中，理论上储存时间是无限的。但是液氮冻存步骤繁琐，需要经过程序降温，如先将冷冻管置于4℃冰箱10分钟，然后移至-20℃冰箱30分钟，再移至-80℃冰箱保存16-18个小时（或隔夜），最后才移至液氮罐中进行长期的储存。

基于以上困境，要如何选一款合适的冻存液？

（1）DMSO含量：渗透性保护剂分子量小可渗透到细胞内，如甘油、DMSO、乙二醇等，其在细胞冷冻存完全凝固之前，渗入细胞内，降低细胞内外溶液中的电解质浓度，阻止细胞内水分外渗，避免细胞过分脱水皱缩，避免细胞内外环境冰晶的生成。DMSO是一类渗透性细胞冻存保护试剂的代表，这类试剂包括：甘油、DMSO、乙烯醇和乙酰胺等。从上述几种物质渗透进出细胞的速度及细胞冻存效果看，DMSO效果更好，所以常规的细胞冻存液大都含有DMSO。传统的细胞冻存液是使用培养基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%。Abbkine联合其它成分，形成新的配方，降低DMSO的含量，保护细胞的同时，降低其毒性。

（2）是否含血清
细胞冻存液含血清是从细胞生长环境角度考虑对细胞进行保护，但含血清（属动物源成分）势必需要考虑细胞污染、批间稳定性等因素。Abbkine开发了不含血清的细胞冻存液，不含血清及动物来源性蛋白，减少病毒、霉菌和支原体等的污染。含血清的细胞冻存液一般采用程序降温（4℃→-20℃→-80℃→液氮），原因是血清中含有大量蛋白、细胞因子，血清含量较大的冻存细胞冻存液在温度快速降低时，会造成有较多蛋白沉淀。

SuperKine™ 快速细胞冻存液（无血清/无蛋白）是一种操作简便，非程序化降温的冻存液。其配方成分明确，无血清、无蛋白，可排除血清或蛋白潜在的病毒或支原体等污染风险，使用更安全。经过了34种常用细胞的验证，细胞复苏存活率高。

产品优势

• 省时省力——直接冻存在-80度冰箱，无程序性降温
• 安全性高——无血清，无蛋白。避免病毒和支原体等污染
• 品质高——存活率高，无批次差异
• 应用广泛——经过34种常用细胞验证，适用于绝大部分细胞

结果展示

图1 将SuperKine™ 快速细胞冻存液（无血清/无蛋白）与A、B、C三个知名品牌同款产品对几种常用的动物细胞进行冻存后复苏，比较细胞活力。结果显示，Abbkine的快速细胞冻存液（无血清/无蛋白）冻存细胞复苏后，其细胞存活率大于或等于其它品牌。

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赋能细胞研究与治疗 Enabling cell research and therapy

亚科因生物技术有限公司（Abbkine Biotechnology Co., Ltd）成立于2017年，总部位于中国武汉。公司致力于细胞科研检测及细胞治疗领域关键试剂的研发、生产和销售，成为全球细胞制药领域创新的关键推动者。公司主营业务包括细胞培养、扩增及储存试剂，细胞代谢、检测及分选试剂盒，细胞治疗用原料及细胞因子等产品及定制化服务。围绕生物试剂研发，亚科因生物已建立了稳定完善的两大关键技术平台：生化试剂配方和重组蛋白表达进化平台，为细胞科研检测及细胞治疗核心试剂的高通量、高效率研发生产提供保障。