相信很多做蛋白实验的小伙伴，这辈子做过最多的实验就是蛋白提取和蛋白定量啦！是否经常蛋白提到一半，心中开始怀疑，这样做是对的吗？这种情况发生是正常的吗？我还要不要继续接着往下做？不用担心，蛋白提取及定量FAQ大合集来啦！

一、 蛋白提取FAQ

① 众多细胞组分，想要分开提取蛋白怎么办？

答：推荐使用Abbkine蛋白提取系列试剂盒，可实现总蛋白、总膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白的分别提取。简单易操作，轻松获得目标蛋白。

② 柱式蛋白提取试剂盒如果暂时没有这个冷冻离心机有其他方式代替吗？

答：一般离心机都是可以调节温度的，建议提前把离心机预冷；低温下有利于保持蛋白的活性。细胞提取可以让细胞在上离心机前冰浴下，然后快速离心30秒；组织提取说明书指导中是需要离心1-2分钟。可以尝试减少加样量，避免浓度过高导致过于浓稠，离心时间就可以稍微缩短一点点。

③ 蛋白提取过程中，可以用匀浆器处理组织吗？

答：匀浆器通常只破坏细胞结构，一般不会对蛋白造成损伤。注意操作过程中控制好温度。

④ 蛋白提取试剂盒可以提骨组织吗？

答：Abbkine蛋白提取系列试剂盒可适用于软骨组织，不推荐硬骨和牙齿等质地坚硬的组织。

⑤ 柱式蛋白的非变性裂解液未经离心就直接流入了收集管中，是否正常？

答： 非变形裂解液未经离心就滴入收集管中是正常现象，因为非变性裂解的方式非常温和，有部分裂解液未和细胞液及时反应，呈现的状态比较清澈，因此能顺利流过滤芯。

⑥ 柱式提取用非变形裂解液提取获得的蛋白浓度为6 mg/mL, OD值才0.5，应该不符合做IP的实验要求吧？

答：6 mg/mL的浓度已经较高了，完全符合做IP实验的要求的。以往的OD值不建议作为参考，如果要用BCA法测定蛋白量，请重新做标曲来测定，参考以往的曲线不准确。

⑦ 感觉细胞量不多了，一个直径10厘米的培养皿，加入了150 μL的裂解液，发现得到的蛋白量很少，样本都不够用了怎么办？

答：根据您的操作步骤可知，细胞量很多，通常情况，直径为10厘米的培养皿，细胞铺满80%的量大约为500万个细胞。蛋白不多的主要原因是裂解液加入量太少了，细胞裂解不完全，建议按照说明书来添加裂解液，可以获得更多蛋白，满足实验要求。

二、 蛋白定量FAQ

① 一般什么情况下需要对蛋白进行定量呢？

答：需要计算蛋白纯化得率时可对纯化后的蛋白进行定量；对细胞裂解液进行定量，可实现多个样本标准化；对纯化后蛋白进行定量，可明确下游实验蛋白用量。

② 什么情况下适合使用BCA 法对蛋白进行定量？

答：BCA 法蛋白定量不受大多数离子型和非离子型洗涤剂的影响，样品中最高可兼容5% SDS，5% Triton X-100，5% Tween-20，60，80。如样本用含有略高浓度去垢剂（SDS，Triton X-100，Tween）建议选用BCA法。

③ 什么情况下适合使用Bradford 法对蛋白进行定量？

答：Bradford 法蛋白定量不受大多数化学物质的影响，样品中最高可兼容1 mM巯基乙醇和5 mM二硫苏糖醇。如样本用含有略高浓度螯合剂(EDTA, EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类，建议选用Bradford法。

 Abbkine蛋白提取及定量系列试剂盒可满足您多种蛋白提取、定量需求，配套蛋白酶抑制剂套装让您的蛋白实验更加得心应手！

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亚科因生物技术有限公司（Abbkine Biotechnology Co., Ltd）成立于2017年，总部位于中国武汉。公司致力于细胞科研检测及细胞治疗领域关键试剂的研发、生产和销售，成为全球细胞制药领域创新的关键推动者。公司主营业务包括细胞培养、扩增及储存试剂，细胞代谢、检测及分选试剂盒，细胞治疗用原料及细胞因子等产品及定制化服务。围绕生物试剂研发，亚科因生物已建立了稳定完善的两大关键技术平台：生化试剂配方和重组蛋白表达进化平台，为细胞科研检测及细胞治疗核心试剂的高通量、高效率研发生产提供保障。